产乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶基因工程菌的构建及遗传稳定性研究.pdf

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2017-08-20 发布于重庆
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产乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶基因工程菌的构建及遗传稳定性研究.pdf

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38 2 工业微生物 Vol. 38 No. 2 2008 4 Industrial Microbiology Apr. 2008 陈悦, 李环, 韦萍 (, 210009) 利用质粒pET 22b(+ ) 为表达载体, 成功构建了产N乙酰鸟氨酸乙酰基酶基因工程菌 L21pET22b( + )argE , 并考察了重组质粒的稳定性双酶切鉴定了质粒构建正确, SDS PAGE 电泳证实了该菌可高效表达目的蛋白连续传代50次实验表明重组质粒具有结构稳定性无选择压力连续传代时,质粒丢失严重; 有选择压力时连续传代未发生质粒丢失现象, 具有较好的分离稳定性发酵过程中,用羧苄青霉素代替氨苄青霉素, 质粒稳定率由77.78% 提高到86. 42% 羧苄青霉素浓度为200gmL 时,质粒稳定率提高到98. 33% : 乙酰鸟氨酸乙酰基酶; 基因工程菌; 重组质粒; 遗传稳定性 [ 3] [4] , , 8 , argA H , ar gE N pET , (EC3.5. 1. 16) N L21(DE3) , [ 1] 1992 , Thierry Meinnel arg E , [ 2] argE , , , [ 1~ 3] , , , , DNA , , ; , [ 5] L21pET22b( + )arg E , , , , , 1 L , L , D, L 1. 1 , pET22b(+ ) (Novagen ) , E . col i L21(DE3) , 1. 2 , , (Oxoid, UK) ; IPTG( : 973 ( 2003C 7160004) : ( 1982~ ) , , , , : E- mail: endospore@ 163. com 23 2 工业微生物 38 , ) 1. 7. 1 连续传代 ND, L , , 98% 1.0% L (+ ) (100 gmL ) , 37 , D, L 24 h50 , 0.05 molL pH7.0