人补体调节蛋白DAF、MCP在哺乳动物细胞中的共表达及协同作用研究.pdf

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, February 25; 24(2): 220-225 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 研究报告 DAFMCP 1,2 1 1 1 1 徐 莉 , 赵舟宙 , 刘 辉 , 蒋达和 , 李文鑫 1 , 430072 2 , 430074 : 利用双启动子构建含人补体调节蛋白DAF 和MCP cDNA 的双顺反子重组表达载体pcDNA3-DAFMCP-DP, 以 磷酸钙沉淀法转染NIH3T3 细胞, 用G418 筛选获得NIH3T3 pcDNA3-DAFMCP-DP 转化细胞。PCR 实验结果显示人补 体调节蛋白基因DAF 和MCP 整合在转化的异源细胞的染色体上。RT-PCR 和Western blot 印迹实验分别从RNA 水平和蛋 白质水平证实了人补体调节蛋白分子 DAF 和 MCP 在细胞系中皆获得同步表达。检测连续传代 30 次的 NIH3T3 pcDNA3-DAFMCP-DP 结果表明人DAF 和MCP 基因仍稳定整合在细胞基因组中, 并未随着传代而丢失, 为稳定的转双 基因细胞系。补体依赖的细胞毒反应表明, pcDNA3-DAFMCP-DP 转染细胞系由于 DAF 和 MCP 的共表达获得较DAF 或 MCP 单一表达时更强的保护能力, 能更好地抑制人补体依赖的细胞毒作用的发生, 保护宿主细胞免受人补体的攻 击。以上结果表明, DAF 和MCP 双基因重组表达载体实现了人补体调节蛋白基因高效转移和高水平共表达, 为获得表 达多种人补体调节蛋白的理想供体提供了有效策略。而且共表达的 DAF 和 MCP 具有协同效应, 能更有效地阻止补体 激活造成的细胞损伤, 在克服超急性排斥反应的基因治疗中具有潜在的临床应用价值。 : 人补体调节蛋白, 双基因重组表达载体, 共表达, 协同作用, 超急性排斥反应 Co-expression and Synergic Effect of Human Complement Regulatory Proteins DAF and MCP 1, 2 1 1 1 1 Li Xu , Zhouzhou Zhao , Hui Liu , Dahe Jiang , and Wenxin Li 1 State Key Lab of Virology, College of Life Sciences, Wuhan University, Wuhan 430072, China 2 College of Life Sc