副结核分枝杆菌HeD蛋白的抗原性分析及在间接ELISA中的应用.pdf

摇 南京农业大学学报摇 2011,34(1):113-117 摇 Journal of NanjingAgricultural University http:/ / 試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試 刘倩,唐泰山,廉慧锋,等.副结核分支杆菌Hed蛋白的抗原性分析及在间接ELISA 中的应用[J]郾 南京农业大学学报,2011,34(1):113-117 副结核分支杆菌Hed蛋白的抗原性分析及在 间接ELISA 中的应用 1 2 3 2 2* 1 刘倩 ,唐泰山 ,廉慧锋 ,王凯民 ,张常印 ,雷治海 (1郾 南京农业大学动物医学院,江苏 南京210095;2郾 江苏出入境检验检疫局,江苏 南京210001; 3郾 山西出入境检验检疫局,山西 太原030024) 摘要:从副结核分支杆菌K-10菌株克隆出840 bp 的hed基因片段,插入原核表达载体pET鄄32a(+),转化至Escherichia coli BL21(DE3),在0郾 -1 8mmol·L IPTG诱导下进行表达,纯化重组蛋白,将其进行Western鄄blot分析、小鼠免疫试验,包被ELISA 板,建立间接ELISA方法。 结果显示:重组蛋白具有良好的抗原性,方阵滴定法确定了间接ELISA方法的抗血清最佳稀释 -1 度(100倍)和抗原包被浓度(4郾4 滋g·mL ),该方法具有较好的特异性和敏感性。 关键词:副结核分支杆菌;Hed蛋白;抗原性分析;间接ELISA + 中图分类号:S852.61 8摇 摇 摇 摇 文献标志码:A摇 摇 摇 摇 文章编号:1000-2030(2011)01-0113-05 Antigenicity analysis of the Mycobacteriumparatuberculosis Hed protein and its application in indirect ELISA 1 2 3 2 2* 1 LIU Qian ,TANGTai鄄shan ,LIAN Hui鄄feng ,WANG Kai鄄min ,ZHANG Chang鄄yin ,LEI Zhi鄄hai (1郾College of Veterinary Medicine,Nanjing Agricultural University,Nanjing210095,China;2郾Jiangsu Entry鄄Exit Inspection and Quarantine Bureau,Nanjing210001,China;3郾Shanxi Entry鄄Exit Inspection and Quarantine Bureau,Taiyuan030024,China) Abstract:To detect antigenicity of Hed protein of Mycobacterium paratuberculosis(Map),and establish the ELISA diagnosis,hed genewas cloned from Mycobacterium paratuberculosis K鄄10,and inserted to pET鄄32a(+)vector. The recombinant plasmid was transformed into compe