工业微生物实验技术 教学课件 作者 陈剑虹 主编 第四章 微生物菌种的筛选诱变与保存技术.ppt

尚辅网 尚辅网 微生物实验技术 第四章 微生物菌种的保藏、筛选及诱变技术 实验4-1 降解苯酚微生物的选育 实验4-1 降解苯酚微生物的选育 实验4-1 降解苯酚微生物的选育 实验4-1 降解苯酚微生物的选育 实验4-1 降解苯酚微生物的选育 实验4-1 降解苯酚微生物的选育 实验4-1 降解苯酚微生物的选育 实验4-1 降解苯酚微生物的选育 实验4-1 降解苯酚微生物的选育 实验4-1 降解苯酚微生物的选育 实验4-2 利用紫外线诱变筛选营养缺陷型突变株 实验4-2 利用紫外线诱变筛选营养缺陷型突变株 实验4-2 利用紫外线诱变筛选营养缺陷型突变株 实验4-2 利用紫外线诱变筛选营养缺陷型突变株 实验4-2 利用紫外线诱变筛选营养缺陷型突变株 实验4-2 利用紫外线诱变筛选营养缺陷型突变株 实验4-2 利用紫外线诱变筛选营养缺陷型突变株 实验4-2 利用紫外线诱变筛选营养缺陷型突变株 实验4-2 利用紫外线诱变筛选营养缺陷型突变株 实验4-2 利用紫外线诱变筛选营养缺陷型突变株 实验４-３　微生物菌种的保藏方法 实验４-３　微生物菌种的保藏方法 实验４-３　微生物菌种的保藏方法 实验４-３　微生物菌种的保藏方法 实验４-３　微生物菌种的保藏方法 实验４-３　微生物菌种的保藏方法 实验４-３　微生物菌种的保藏方法 实验４-３　微生物菌种的保藏方法 实验４-３　微生物菌种的保藏方法 实验4-4　 苏云金杆菌的复壮 实验4-4　 苏云金杆菌的复壮 实验4-4　 苏云金杆菌的复壮 实验4-4　 苏云金杆菌的复壮 实验4-4　 苏云金杆菌的复壮 实验4-4　 苏云金杆菌的复壮 实验4-4　 苏云金杆菌的复壮 实验4-4　 苏云金杆菌的复壮 尚辅网 　　（5）保藏 将已注入液体石蜡的斜面培养物直立，置于4～5℃冰箱或室温下保存。 　　（6）转接 到保藏期后，需将菌种转接至新的斜面培养基上，培养后再加入适量灭菌液体石蜡，进行保藏。 注意：从液体石蜡下面取培养物移种后接种环在火焰上烧灼时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅。 　　五、实验报告 记录各种菌种保藏的方法和结果。 返回 尚辅网 　　一、实验目的 学习从病虫体内复壮病原菌的一般方法。 　　二、实验原理 苏云金杆菌及其变种杀螟杆菌、青虫菌和松毛虫杆菌等都是昆虫的致病细菌。将它们经过固体或液体培养基大量培养后，可收集其菌体并添加适量的填充料如碳酸钙等，以制成杀虫菌粉。它对玉米螟、稻苞虫、粘虫、松毛虫、棉铃虫和菜青虫等几十种鳞翅目昆虫的幼虫均具有很强的感染力。 尚辅网 生产菌种经过若干代之后往往会出现菌种衰退，表现为产芽孢或伴孢晶体的数量越来越少，体积变小，毒力下降等。为了保证生产菌种能保持较强的毒力和原有的性状，就要进行经常性的菌种复壮工作。对于杀虫菌来讲，复壮就是用原来生产菌种制成悬浮液，然后将它拌到饲料中饲养昆虫(选健壮的3龄幼虫)，待昆虫死后再从虫体内重新分离出苏云金杆菌。如此重复4～8次即可得到毒力强的菌种。另外，也可从自然界死亡虫体中分离菌种。 尚辅网 　　三、实验材料 　　1. 培养基　 牛肉膏蛋白胨培养基。 　　2. 器材 显微镜，无菌培养皿，无菌三角瓶(内装玻璃珠)，镊子，解剖针，无菌滴管等。 　　3. 试剂　75%乙醇，5.25%次氯酸钠(即漂白粉)，10%硫代硫酸钠。 　　四、实验方法 　　1. 制备菌液　将菌接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，置30℃恒温培养24h后，用无菌水洗下菌苔制成孢子悬液。 尚辅网 　　2. 感染昆虫　将上述菌液滴加在喂饲昆虫的叶片上，晾干后任昆虫(挑选健壮的3龄幼虫)取食，然后将虫子放25℃恒温条件下饲养，待昆虫死亡后采集死虫。 　　3. 采集死虫　濒于死亡的昆虫幼虫停止取食后，口吐褐色体液，排泄稀粪于叶片或其他附着物上，部分或大部分的虫体开始变为褐色。由于细菌在虫体内大量繁殖，结果使幼虫的体壁变得薄而易破，因此采集时要特别小心。将采集来的昆虫放在无菌培养皿或无菌小瓶中。如果死虫紧贴在粘附物上可连同基物一起采集。 尚辅网 　　4. 虫体表面消毒　为防止消毒溶液渗入体腔，应用棉线结扎虫体的口腔和肛门。将虫体浸入75%乙醇中，浸数秒钟后即移入含5.25%漂白粉的溶液中，浸3～5 min，再将虫体转入10%硫代硫酸钠溶液内浸3～5min，以除去游离的氯，最后用无菌水冲洗虫体5次，供分离菌种用