促红细胞生成素对大鼠肝部分切除术后肝脏保护和再生的双重作用.docVIP

促红细胞生成素对大鼠肝部分切除术后肝脏保护和再生的双重作用 眼下，肝脏肿瘤切除术是原发或继发肝脏肿瘤患者的比较有效的治疗方式。本研究的目的是评价重组人红细胞生成素的作用(rhEPO)在大鼠肝部分切除术后肝脏的保护和再生中的价值。在行肝脏70%切除术30分钟前，对照组大鼠腹腔内注射生理盐水；实验组腹腔内注射重组人促红细胞生成素rhEPO（(4 U/g）。肝功能评估指标为国际标准化比率(INR)；肝损伤评估指标为血清丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶 ；肝细胞凋亡由肝内caspase-3活动情况及组织学标准评估；残余肝脏的再生能力由术后7天的再生肝/体重比，免疫组织化学标记细胞增殖因子(ki - 67)、血管性血友病因子 von Willebrand factor)，以及细胞外信号调节激酶的活性评估。对肝切除术后2天和4天的大鼠研究发现，实验组再生肝/体重比显著高于对照组（P 0.005）；实验组血清转氨酶及INR水平显著低于对照组。使用免疫组化及应用末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法分析肝内肝caspase-3活性，对照组及实验组没有统计学差异。术后2天，对照组有丝分裂指数,ki - 67和血管性血友病因子的表达和细胞外信号调节激酶的活性明显高于实验组（P 0.005）。综上，通过对实验组及对照组的研究，促红细胞生成素对大鼠肝部分切除术后肝脏保护和再生确实起到了独特的双重作用。 眼下，肝脏肿瘤切除术是原发或继发肝脏肿瘤患者的比较有效的治疗方式。但为了避免患者术后几天内出现肝衰竭甚至死亡，确保剩余肝脏功能足够，肝切除范围是有限制的。肝切术后患者均会出现凝血酶原时间延长,国际标准化比率(INR)的水平变化。肝硬化患者肝功能及再生能力较差，所以对肝切除手术的耐受力也较差。所有这些因素都制约了肝硬化患者的肝切除手术。由手术中血流阻断发生的缺血/再灌注损伤(I / R），在肝脏手术后肝功能障碍的发生也有重要影响。切除70%甚至90%的肝脏后，超过90%的干细胞都在自我复制。术后肝脏再生是个复杂的过程，其中大量的生长因子和细胞因子参与调节肝脏再生。诸如核因子kB(NFkB)和胞内信号通路，促分化活化蛋白酶等，此类促进增值、分化的因子在剩余肝脏中大量激活。特别是磷酸化细胞外信号调节激酶、氨基末端激酶、受体酪氨酸激酶促进了这些因子的激活。另外，细胞凋亡在肝脏再生中的作用仍有争论。 促红细胞生成素因其能有效的刺激红细胞生成而命名，但在必威体育精装版的研究中，也发现其在各种各样的组织损伤,包括心肌和肾脏的缺血再灌注损伤中，起到了强大的保护作用。在EPO结合其受体的过程中，可能也打开了许多细胞内通路，例如促分化活化蛋白酶、JNK, NFkB, 和 PI3K等。研究表明EPO的心脏保护机制包括了：促进血管生成，重建组织结构；抑制NFkB因子及激活蛋白，从而对抗炎症；促进细胞外信号调节激酶的活性；抑制细胞凋亡。以往在独立的大鼠模型上研究发现，EPO通过减弱细胞凋亡，降低JNK、IkBa活性，促进肝内血管生成这些途径保护肝脏，减少了缺血/再灌注损伤。所以，本研究的目的是评价重组人红细胞生成素(rhEPO)在肝切除术后，保护肝脏（缺血/再灌注损伤和细胞凋亡）和肝脏再生方面的作用。 材料和方法 动物和药物 所有实验遵照特拉维夫大学动物保健和使用委员会的指南(特拉维夫,以色列)。 手术程序 采用成年雄性Wista大鼠,体重250 - 300克, 老鼠被随机分为3组(n=10):(1)空白组,进行了虚假的操作(标记为基准),(2)对照组：肝切除组与生理盐水处理,和(3)实验组：大鼠肝切除前30分钟使用rhEPO处理。因在初步研究中,采用低,高剂量(1和4 U)大鼠腹腔内接种rhEPO测试,高剂量表现出最好的结果，所以实验组老鼠腹腔内预处理方案为hEPO4 U r / g。对照组老鼠腹腔内注射相同体积的溶剂(0.9%生理盐水)。麻醉采用腹腔内注射90毫克/公斤氯胺酮和甲苯噻嗪10毫克/公斤。用70%肝切除术诱导肝脏再生。腹部中线剖腹切口,左、右肝叶和尾状叶使用6-0的丝线缝合和结扎切除肝脏。随机每组第2、4、7去处大鼠肝脏。 肝脏/体重重量比(LBWR) 切下的肝脏视为占总肝脏70%，并将大鼠称重得到总重（B）。经过术后观察期后，切下一再生的肝脏并称重，得到肝脏重量（A）。肝脏/体重重量比(LBWR)计算功能如下：LBWR （%） =A/B*100 肝脏酶学指标 收集血清样本，立即置入冰块中，马上送入4oC冷藏。遵照使用说明使用试剂盒测定血清AST、ALT水平。 肝内Caspase-3活性测定 取下肝脏标本后速冻，并使用Polytron homogenizer均浆器混匀，使用Caspase-3活性测定试剂盒测定其活性 病理 肝脏切片标本采用标准HE染色，并由作者随