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免疫组化基本技术（一）  RCA法 IGSS IS-PCR CSA法 UIP Envision LSAB法 双PAP法 PAP法 主要内容 一、人体组织标本的取材 二、动物组织标本的取材 三、取材注意事项 四、细胞标本的准备 五、组织的固定、脱水、透明和包埋 六、切片 七、组织与细胞材料的保存 概 述 免疫组织化学（Immunohistochemistry; IHC） 技术是一门综合性技术，除了具备优质、高效，特异的一抗，敏感的检测方法，稳定的显示系统外，还需要掌握组织标本或标本的取材、固定、包埋、切片，以及IHC前的处理，内源性酶的消除方法，非特异背景的消除方法，怎样防止IHC染色过程中的脱片。 一、人体组织标本的取材 手术切除标本，各种活检穿刺标本和尸体解剖标本。 1.手术切除标本的取材： 抗原在组织中的分布常不均一，取材时应考虑：主要病灶，病灶与正常组织交界处，远离病灶的正常组织。组织大小：长1cm×宽1cm×厚0.2～0.3cm。 2.各种小组织的活检取材： 它不仅体积小，取材困难，不易取到主要病灶，因此对标本的处理应特别慎重，及时固定，包埋时要平整。 2.注意防止人为因素的影响  刀和剪要快，刀要足够长。3.组织块的大小  厚为0.1～0.3cm，大小可根据需要而定4.动物和人体组织的取材位置 要视研究目的，观察部位而定 5.取材时间 原则上，应尽快取材，但比较大的手术标本如胃、肺、肠等器官，最好先固定后取材。 6.注意包埋方向 7.边缘标记 8.保持材料的清洁 9.切除不需要的部分10.明确编号，登记11.骨组织还需脱钙 四、细胞材料的准备 细胞的取材和制片法： 1.印片法：常用于活检或手术切除标本。将新鲜标本沿病灶中心剖开，将病灶区轻压于载玻片上，吹干后立即固定20～30min。 优点：操作简单，抗原保存好缺点：细胞厚薄不均，IHC染色易引起背 景染色。 2.穿刺吸取法 3.沉淀法 主要用于胸水、腹水、尿液、脑脊液等体液多而细胞较少的标本。  （1）常规细胞玻片制片法 （2）单核细胞分离法 * ABC法 桥法 间接法 直接法 第一部分 组织与细胞材料的制备 内容：组织与细胞材料 的取材和保存 3.穿刺标本的取材： 光镜（HE、特殊染色、IHC、ISH） 电镜（透射电镜、免疫电镜） 4.尸检组织的取材 病人死亡后，一般要在数小时后才能做尸检，因此，及时取材，尽早固定是开展IHC检测的关键。 二、动物组织标本的取材 动物的处死方式一般为活杀，组织标本来源较新鲜，10min内即可完成固定和冷冻保存，脑组织和神经组织应采用灌注固定后，再进行后固定。 动物处死方法： 1.麻醉法 乙醚或4％戊巴比妥静注 2.空气栓塞法 3.断头法 4.击头法 5.股动脉放血法 三、组织取材注意事项 1.组织要求离体后30min内浸入固定液，尤其是开展分子生物学工作。动物组织取材要求心脏还在跳动时取材。 *