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实验肝糖元的提取和鉴定.ppt
实验 肝糖元的提取和鉴定 一、实验原理 糖原在浓碱中稳定，将肝组织先置于浓碱中加热，使蛋白质及其他成分分解而保留肝糖元。再用浓硫酸使糖原脱水生成糖醛衍生物，衍生物和蒽酮作用形成蓝色化合物，与同法处理的标准葡萄糖一起比色定量。 三、实验试剂 1、30%NaOH溶液：30gNaOH溶于100ml蒸馏水中 2 、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：准确称取10mg分析纯葡萄糖（预先在110干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后，定容至100ml. 3、显色剂：称取0.2g蒽酮加入100ml浓硫酸中。此试剂不稳定，以临用时配用为宜，冰箱保存可用4—5天 四、实验步骤 1、准确称取肝组织0.5g，放入盛有1.5ml30%NaOH的试管中，置于沸水浴中加热20分钟，取出后冷却，将管中内溶物全部转移到100ml容量瓶中（用蒸馏水多次洗涤试管，一并收入容量瓶）加蒸馏水定容。 2、取干燥试管三支，注明空白管、标准管、测定管，按下表进行操作。加毕，摇匀，置沸水浴中10分钟，冷却，以空白管调节零点，在620nm波长下比色测定。 五、结果计算 100g肝组织中所含糖原的克数 =（OD测/OD标）×C标×2×100×（1/1000）× （100/111）× （100/0.5） 注：100/111是此法测的葡萄糖含量换算为糖原含量的常数，即100g糖原用蒽酮试剂显色相当于111g葡萄糖用蒽酮试剂所显得色 注意事项 1、蒽酮试剂室温下易变性，不用时请不要拿出冰箱。蒽酮试剂用完后，请务必立即放回冰箱中。 2、蒽酮试剂里含浓硫酸，所以在实验过程中应注意安全。 3、将溶液倒入比色皿中时，一定不要倒的太多，且不要将其放在分光光度计上，因为浓硫酸有强腐蚀性，容易腐蚀仪器。 4、比色完的溶液不要倒入水池中，要倒入指定的回收桶中。 * * 二、实验仪器 1、? 新鲜肝脏 2、? 100ml容量瓶 3、? 7220分光光度计 4、? 水浴锅 5、? 试管(ml、2ml、5ml)
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