小鼠乳腺上皮细胞体外原代培养方法研究进展.docVIP

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小鼠乳腺上皮细胞体外原代培养方法研究进展.doc

小鼠乳腺上皮细胞体外原代培养方法研究进展 摘要 综述了有关于小鼠乳腺上皮细胞体外原代培养方法的研究进展,阐述了乳腺细胞培养的意义,介绍了乳腺组织原代培养的过程, 并分析了所取得的研究成果。 关键词 小鼠;乳腺上皮细胞;原代培养;细胞工程   原代培养即直接从有机体摘取细胞、组 织或器官,使其在体外维持与生长。合适的培养条件对体 外培养细胞的生存和增殖都十分重要。一般而言,不同动 物、不同组织器官来源的细胞对培养条件的要求存在一定差 异,因此,需要使体外环境下的培养条件尽可能地模拟体内 环境。体内乳腺组织的增殖、分化和组织结构重塑受内环境 (如类固醇、生长因子、结合蛋白及细胞外基质间复杂的相互 作用等)因素的影响和作用,这些因素同样也影响体外培养 乳腺上皮细胞的增殖分化和功能表现。对于某种动物特 定组织细胞的体外培养,对培养液、添加因子、附着底物及培 养温度、pH值等都需进行仔细的选择,乳腺上皮细胞的体外 培养建立在乳腺上皮原代培养细胞的基础上,针对不同的研 究目的应采取不同的培养方法,以对细胞进行分化诱导。 张以涛比较了不同pH值、不同血清浓度配比的生长培养液 对小鼠乳腺上皮细胞生长的影响,结果表明, pH值7. 4含 10%血清的培养基为最佳生长液。现代研究普遍认为,内 分泌激素在乳腺上皮细胞发育各个阶段都发挥影响作用,不 同时期乳腺组织的形态、组成及功能均有差异,这对选择乳 腺上皮细胞体外培养的取材时间有指导意义。张以涛比 较了取自不同时期乳腺上皮细胞的生物学特性,得出妊娠期 细胞生存、增殖能力均强于泌乳期细胞,妊娠期小鼠乳腺为 获得细胞的最佳取材时期。乳腺上皮细胞的原代培养,首 先是尽可能地分离出乳腺上皮细胞,同时减少分离过程对细 胞的损伤和浪费,以及通过采用一定的方法,使最终得到富 集的乳腺上皮细胞及杂质细胞尽可能少甚至被完全清除。 1 乳腺细胞培养的意义 将动物细胞或组织在体外进行培养,能有效排除神经体 液等因素对其造成的影响,可直接进行药物对细胞的活动代 谢、毒性和杀伤作用等检测,如秦君等以王不留行为试验材 料,对其3类主要成分(皂甙类、黄酮甙类及香豆素类)进行 提取,分别以不同浓度添加到细胞培养液中,寻找王不留行 促进泌乳的有效成分。与细菌相比,可合成并分泌蛋白质 的细胞具有修饰功能,若对外源基因进行表达,则可生产出 许多与人类健康和生存密切相关的生物技术产品。自从 Gordon等应用转基因技术从哺乳期小鼠的乳腺中分泌人组 织源性纤维酶原激活剂以来,对乳腺生物反应器的研究得到 了迅速发展,让外源基因在哺乳动物的乳腺中特异表达, 使转基因动物的乳腺组织可直接生产药用蛋白已成为近年 来生物技术领域新的研究热点,世界各国对转基因动物乳腺 生物反应器的研究极为重视。利用人工培养的动物细胞 繁殖病毒,大大减少了用病毒直接在动物体进一步繁殖而造 成的经济损失。此外,乳腺上皮细胞是乳腺的主要组成和分 泌功能成分,而乳腺癌属高发病,国内外许多研究者都研究 乳腺癌的发生发展机理,这使乳腺上皮细胞培养进一步受到 了重视。 细胞培养工程正在逐步形成一支独特的高新技术产业, 并显示出巨大的工业发展前景。许多科学家把乳腺视为 一种理想的试验模型系统,用以研究解决许多基础原理问 题,其涉及的领域有细胞生物学、发育生物学及内分泌学、生 物化学与分子生物学等学科,为医药产业开创了一个新的 制药途径。乳腺细胞培养是研究构建模型系统的基础,为研 究提供了大量上皮细胞。 2 乳腺组织原代培养的过程 2. 1 乳腺上皮细胞的原代培养要点 乳腺的间质和实质的 基本结构随发情周期的改变而改变,静止期乳腺脂肪细胞和 结缔组织多,间质发达;活动期尤其在妊娠期乳腺实质发达, 腺泡数量增多且变大。在母畜妊娠中期,发育中的腺泡出 现分泌腔,腺泡和导管的体积不断增大,同时乳房内的血管 和神经纤维不断增生,且在这个时期所采集的乳腺组织 中所含杂质,如脂滴和结缔组织相对较少,这大大降低了乳 腺细胞体外培养的劣势。因此,对小鼠乳腺细胞的体外培养 取材,大多采用妊娠中期小鼠乳腺,能得到相对较多的乳腺 腺泡细胞,妊娠期小鼠乳腺细胞增殖能力旺盛,适合于传代 培养。 当前,原代乳腺上皮细胞培养大都采用组织块培养法及 胶原酶消化法。李震等比较了几种乳腺细胞分离培养方 法的特点,证明了胶原酶消化法和组织块种植法均可用于动 物原代乳腺细胞的培养,且比较了这2种方法的优缺点,结 果表明,胶原酶消化法容易得到均匀的乳腺细胞,且上皮细 胞所占比例也较高;组织块培养法不容易丢失,不易损伤上 皮细胞,上皮细胞长出较晚,且所占比例较低;组织块直接培 养法操作过程简单,但细胞从组织块长出所需时间较长,成 纤维等结缔组织细胞最先长出,随后出现含上皮细胞丰富的 细胞单层,该方法比较适合于小动物(如小鼠)的

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