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辅酶Q10前体脂质体的研制及其特性研究 09生工（1）班 陈览 0802011009 摘要：为提高辅酶Q10脂质体的稳定性，采用冷冻干燥法制备辅酶Q10前体脂质体。选择蔗糖、海藻糖、甘露醇、乳糖等作冻干保护剂，研究复水前后辅酶Q10。脂质体的形态、粒径分布和包封率，并研究了辅酶Q10。前体脂质体红外光谱性质，比较冷冻干燥保护剂种类及用量对辅酶Q10。脂质体的保护作用。优选保护剂为海藻糖，与卵磷脂质量比为4：l，辅 酶Q10前体脂质体水合重建后平均粒径为508nm，包封率达75％。红外光谱分析表明海藻糖与磷脂P=0基团之间形成氢键作用最强。 关键词：辅酶Q10；前体脂质体；冷冻干燥法；冷冻保护剂；红外光谱 引言 辅酶Q10 (Co Q10)是天然抗氧化剂和细胞代激活剂【1-2】。美国FDA早征80年代已批准辅酶Q10可作为膳食补充剂【3】。采用脂质体包埋的辅酶Q10具有很好的水溶性，更利于人体吸收，存保健食品领域也将有广阔的应用前景【4】。普通脂质体以液体形式存在。在贮存过程中易发牛聚集沉降、磷脂氧化分解、包封物渗漏等问题，导致脂质体不稳定。前体脂质体由Payne等首次提出，将构成脂质休的膜材、药物及支撑撑剂用适当方制成颗粒状、冻干状等干燥形 式，用前加水水化后即可形成脂质体【5】。1978年 Vanleberghe等首次报道采用冷冻干燥法提高脂质体的贮存稳定性。目前，该法已成为较有前途的改善 脂质体制剂长期稳定性的方法之一【6】。本文采用冷冻干燥法研制辅酶Q10川前体脂质体，选择合适的保护剂以提高其复水稳定性，并研究有关性质，探讨保护剂对脂质体的作用机制。 1材料与方法 1.1材料与设备 辅酶Q10 98．0％～101．0％，日清制药；蛋黄磷脂 (EPC) 生化试剂，华东!JIlj范大学化 J二厂；吐温80 (Tween 80) 化学纯，围药(集团)上海化学试剂公 刊；海藻糖(trehalose，Tre) 食品级，日本林原株氏 会社；乳糖 分析纯一 海恒信化学试剂有限公司； 胆固醇(Cho1)、蔗糖、目 露醇、葡萄糖、IlI梨醇等均为分析纯，国药集团化学试剂有限公司。uV—ll00型紫外一可见分光光度计 北京瑞利 分析仪器公 司；VCX50型超声处理器美国 SONICSMATERIALS公司；FreeZone 6升立式冻下机Labconeo公司；Nano—ZS90型粒径分析仪英国Malvern公司；Nexus傅叶红外光谱仪美国Nicolet公司；CSPM4000扫描探针显微镜广州本原纳米仪器有限公司。 1．2 实验方法 1.2.1 辅酶Q10前体脂质体的制备 1.2.1.1采用乙醇注入一超声法【7】制备液态辅酶Q10脂质体 按配方称取磷脂、胆 醇、Tween 80及辅酶Q10比例为EPL：Co Q10：Chol：Tween 80=2．5：1 2：0．4：1．8(g／g)，EPL的浓度为1．25％(g／mL)，加入2mL无水乙醇，于55℃水浴至溶，用注射器快速将其注入20mL水化介质，取适量保护剂用pH7．4，0．01 mol／L磷酸缓冲液溶解，搅拌水化30min，旋转蒸发除去乙醇(55oC，真空度0．1MPa)，迅速冷却，冰浴超声处理4min(脉冲1 s／1 s)，冷冻离心30min(11000 X g，4℃)后充人N，密封，置于冰箱冷藏保存。空白脂质体的制备则称取等量脂质溶于乙醇，其余步骤与辅酶Q10脂质体的制备相同。 1.2.1.2冷冻干燥工艺 取1mL辅酶Q10脂质体分装于安瓿瓶中，一70℃预冻24h，冷冻干燥(一30oC 20h，一10oC lOh，一4oC 5h，25oC 3h，真空度 0．1MPa)，压盖封口，即得辅酶Q10前体脂质体，冻干后的样品置干燥器中，于室温避光密闭保存。 1.2.1.3 复水 取1瓶辅酶Q10前体脂质体，加入 1mL去离子水充分混匀，即得辅酶Q10脂质体。 1.2.2辅酶Q10脂质体包封率的测定 辅酶Q10含量的测定：采用Tween 80增溶一紫外分光光度法；游离辅酶Q10含量的测定：采用正戊烷洗涤一紫外分光光度法【8】。 1.2.3辅酶Q10脂质体粒径的测定 采用配有He／Ne激光器(入=633nm)的Nano—ZS90粒径分析仪，散射角为90。。将待测样品装入聚苯乙烯比色lI[中(折光指数1．33)，25±0．1℃下保温3min，测定，记录平均粒 径(Dz)和粒径分布情况(多分散指数PDI)。 1.2.4 辅酶Q10前体脂质体傅里叶红外光谱(FTIR)分析 取出少许辅酶Q10前体脂质体样品，与干燥的KBr混合。研磨至细粉状，充分混合后置人锭剂成型器中进行压片；将压片放人红外光谱仪样品槽中，测定红外吸收光谱，波数范围为400～4000em～。