单纯疱疹病毒Ⅱ型IgM抗体诊断试剂盒(酶联免疫法).docVIP

单纯疱疹病毒Ⅱ型IgM抗体诊断试剂盒（酶联免疫法） 【产品名称】单纯疱疹病毒Ⅱ型IgM抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）。 【用途】利用酶联免疫吸附法（ELISA）定性检测人血清或血浆中的风疹病毒（RV）IgM抗体，适用于人类风疹病毒感染的辅助诊断。 【试验原理】 本试剂盒采用捕获法原理检测人血清或血浆样品中风疹病毒IgM抗体（RV-IgM），微孔中预包被鼠抗人-IgM（U-链），首先加入待测标本的血清或血浆样品后，样品中的IgM抗体都可被捕获，为结合的其他成分（包括特异的IgG抗体）请被洗涤除去，第二步，加入RV抗原酶标记物，被捕获的IgM中的RV-IgM会与来更过氧化物酶标记的RV重组抗原特异性的结合，洗去其它未结合物，做好用TMB底物显色。通过酶标仪检测吸光度（A值）从而判定样品中的RV-IgM抗体的存在与否。 【主要组成成分】 1抗人-IgM（U-链）包被板 1块（48孔/96孔），4×12/8×12孔板，微孔条 可以拆开使用。包被板由板条和板架组成，与含有干燥剂的铝箔袋密封。未使用完的微孔条与干燥剂一起放在塑料袋中放置于2-8℃保存，包被板放置与自封袋保存后，减少开封次数，不良的保存条件将缩短稳定期。 2 RV-IgM阳性对照 1支（0.5ml），主要成分为蛋白缓冲稀释液稀释的RV-IgM抗体，含稳定剂、防腐剂。 3 RV-IgM阳性对照 1支（0.5ml），主要成分为蛋白缓冲稀释液稀释的正常人血清，检测无RV-IgM抗体反应，含稳定剂、防腐剂。 4 酶标工作液 1瓶（3ml/6ml），主要成分为辣根过氧化物酶标记的RV重组抗原，含稳定剂。 5 浓缩洗涤液（20×） 1瓶（20ml/50ml），为无色液体，成分为磷酸缓冲液和吐温20。用前用蒸馏水或去离子水按照1:20的比例稀释。 6 底物液A 1瓶（3ml/6ml），为无色液体，主要成分为过氧化物。 7 底物液B 1瓶（3ml/6ml），为无色液体，主要成分为TMB。 8 终止液 1瓶（3ml/6ml），为无色液体，主要成分为2M H2SO4。 9 自封袋 1个将微孔板装入自封袋，封紧袋口。 10 封板膜 3张在温育时防止水份蒸发和污染。 【使用仪器及所需材料】 蒸馏水或去离子水 一次性手套和定时器 吸水纸 25ml、100ml、1000ml可度量筒 酶免自动仪器或者手持单道/多道移液器 适用于盛放污物的容器 温箱或水浴箱 手用于混合微孔内液体的震荡器 全自动、半自动或手工洗板系统 酶标仪，单波长450nm或双波长450nm和630nm 【样本要求】 血清和血浆都可以用来检测，新鲜采集的标本应先充分离心，然后去澄清的液体进行检测，如果未充分沉淀，悬浮的纤维蛋白可能引起假阳性。 标本含有EDTA、柠檬酸钠、肝素钠等抗凝剂时，不影响结果，但是高血脂、高溶血或高蛋白血标本可能导致错误结果。 不要使用热灭活后的标本，加热灭活可是样本中IgM抗体降解。 标本储存在2-8℃，一周内不需要检测的标本应储存在-20℃一下，避免反复冻融。 【试验方法】 取出试剂盒置室温平衡30分钟。将20×洗涤液用蒸馏水做20倍稀释。 加样品：取50ul待测血清液加入反应板孔内，同时预留阴、阳性及空白对照共5孔。 加入阴性对照3孔，阳性对照1孔，各50ul对照血清，空白对照1孔位置。将反应板轻轻震荡是样品混匀。 温育:用封板膜封板后，置37℃温箱或水浴中反应30分钟。 洗板：温育后，将封板膜揭掉，吸干孔内液体，用洗涤液洗板5次，每次浸泡30秒。 加酶标工作液：每孔加入50ul酶标工作液，空白孔除外。 温育：用封板膜封板后，置37℃温箱或水浴中反应30分钟。 洗板：温育后，将封板膜揭掉，吸干孔内液体，用洗涤液洗板5次，每次浸泡30秒。 显色：每孔加入底物A、B液50ul，轻轻震荡混匀，用封板膜封板后，置37℃温箱或水浴浸泡30分钟。 终止：每孔加入终止液50ul，轻轻震荡混匀。 测定：设定酶标仪波长于450nm（建议双波长450/630nm检测），测定各孔A450值。注意：终止液反应30分钟内度数。 当使用单波长时，校准空白孔，设定酶标仪波长于450nm，测定各孔A450值，当使用双波长450/630nm检测时，可以不设空白孔，直接测定各孔A值。 【结果判断】 每个试剂结果独立使用，通过（Cut off）值判定结果。 计算临界值：Cut off（C.0）=1.10+阴性对照平均（NC）A450值（当阴性平均A450值小于0.05时，按0.05计算；当阴性平均A450值大于或等于0