单细胞凝胶电泳技术在环境污染物检测中的应用.pdfVIP

环境科学与技术 　　第 26 卷 　第 4 期 　2003 年 7 月 单细胞凝胶电泳技术在环境污染物检测中的应用 张 　波 , 　刘承芸 , 　孟紫强 ( 山西大学生命科学与技术学院 ,环境医学与毒理学研究所 ,太原 　030006) ( ) 摘　要 :主要介绍了单细胞凝胶电泳技术 SCGE ,包括 SCGE 的原理、方法及其在环境污染物检测中的应用,该技术可用多种污染 物的检测且灵敏度高 ,具有广阔的应用前景。即 SCGE 对大气污染物、重金属、醛类及辐射污染的检测 ,具有高度敏感性 ,是具有广阔应 用前景的新技术。 ( ) 关键词 : 单细胞凝胶电泳 SCGE ; 　环境污染物 ; 　DNA 损伤 中图分类号:X830 　　文献标识码 :B 　　文章编号 (2003) ( [3 ] 　　单细胞凝胶电泳 single cell microgel electrophore 件建立的 SCGE 技术 。 ) ( ) siss ,SCGE 又称彗星实验 comet assay , 是近年来发 2. 1 　细胞准备 展起来的检测单细胞水平 DNA 损伤的新技术。最初 在体外实验中 ,将对数期生长的细胞用胰蛋白酶 由Ostling 和Johanson[1 ] 于 1984 年首先建立 SCGE 技 消化 ,收集细胞备用。在体内实验中 ,取需测试的脏器 术 ,1988 年 Singh 等[2 ] 对实验条件进行了改良 ,大大 ( ) 或组织 ,用磷酸缓冲液 PBS 洗净后 , 剪至糜状滴加 提高了检测 DNA 损伤的敏感性 ,从而使该方法显示 PBS 研磨 ,过 300 目筛子, 收集细胞 ,悬浮于 PBS 中 , 了强大的生命力。由于 SCGE 具有简便、快速、需样品 6 细胞密度为 10 个/ mL , 台盼蓝染色、镜检、细胞存活率 量少和对环境污染物、致癌剂的检测谱宽 ,灵敏性高等 90 %以上,即可进行以下操作。 优点[3 ] , 其应用日益广泛。该技术可用于体内外实 2. 2 　胶板的制备 验 ,并应用于各种有核细胞检测受试物对 DNA 损伤 μ 将预热 45 ℃的 80 L0. 6 % 正常熔点琼脂糖 和修复效应以及环境生物监测、药物筛选 ,肿瘤发病机 ( ) 2 + 2 + ( ) NMA ,溶于无 Ca ,Mg 的磷酸缓冲液 PBS 滴到同 理及诊断与治疗、衰老和细胞凋亡机制的研究 ,正在形 样预热的载玻片的磨砂面 ,迅速盖上干净的盖玻片 ,室 成一个新的研究领域。本文就该技术的原理、操作方 温下 10min 使其凝固 ;将 10μ