ＩＬ－３和ＳＣＦ对脐血造血细胞扩增和分化的影响.pdfVIP

IL一3和SCF对脐血造血细胞扩增和分化的影响 张孝兵蔡海波谭文松俞俊棠 (华东理工大学生物反应嚣工程蛔家重点实验室上海200237) 摘要脐血是一种潜在的可月I于造血重建的重要干细胞来源，脐血干细胞体外扩增是实现其 临床应用的重要前提．本文利用半量稀释培养方法：a-褰-r白介素3(IL一3)和干细胞因子(SCF) 两种细胞因子在不同浓度组合的．}|况下对脐血细商扩增和分化的影响．在培养分离的脐血单个棱 5．0+2．0王tJ42．5+2。5倍．结果表 2．31：1．3倍，CFU-GM扩增1 细胞12天后，细胞总敦扩增2．1+1．5到1 明．高浓度的细胞因子有利于总抽胞教的扩增，但电Fu—伽扩增倍敷不高；而低浓度的细胞因子组 夸不利于总细胞敏的扩增，但cF0一GM的扩增倍数神较高． 关麓词造血干细胞脐剑白细胞介素3年细胞因于细胞培养律外扩增 { ‘ 造血干细胞移植是用于治疗白}血病、淋巴瘤等多种恶性血液病的最佳办法，同时也可用于治 疗乳腺癌、黑色素瘤等几种实体j齑j[t1．脐血于细臆移植是骨髓和外周血于细胞移植的备谴方案。 虽然脐血干细胞相对于骨髓和外周缸来说，容易毫得，但脐血的量很少，一般为lOOml左右，只 能满足较小儿童移植的需要，‘故人寸】想通：过：体外l辨来增加脐血干细胞的数量以满足较大儿童和 成人移植的需要qI。 j 细胞因子对于介导造血干，祖细胞的扩增和分化必不可少。一般认为，SCF主要作用于早期 干／祖细胞，它使细胞走出Go期，并始扩增口l。IL-3也作用于比较早期的干，祖缎胞，但同时也对定 向祖细胞起作用。它们单独使用时，对细胞扩增曲刺激作用都不大，联合使用时则效果明显14】。 造血干，祖细胞在体外培养过程中，不仅进行警自我更新，同时也不断分化为各种成熟血细 胞。其自我更新和分化的速率与添}0玎的细胞因子和培养条件密切相关。一般来说，细胞因子的种 类越多，越有利于获得更高的千，穗细胞扩增倍数；但有临床实验表明，只用IL-3和SCF两种细胞 因子可能比添加更多细胞因子进行培养所获得的霸胞更有利于植入阿。但这两种细胞因子的浓度 配比对造血干片矗细胞扩增的影响赶未见报道，为眦本文采用半量稀释培养方法，系统考察不同 浓度IL一3和scF组合对脐血造血干粗细胞扩增和强化的影响。 ‘ I 1材料和方法 、‘ l-1脐血单个核细胞分离方法l ，． 脐血由中国福利会国际和平如幼保健院提供，用20～50u／ml的肝素抗凝，’诹血后6h之内进行 分离。先用3％的明胶(Sigma)沉降后，取上层平铺劐比重为1．077的淋巴细胞分离液(上海生化所) 上，用Beckman离心机2000 mIn菩收集界面层之上的细胞后．用lMDM培养基洗 r／min离心20～25 涤2～3次待用。 ： f 1．2液体培养方法 { ， 接种密度为6×105单个核细胞／ml。4细胞因子IL-3釉SCF‘均购于上海贝特生物技术有限公司，每孔 只添加这两种细胞因子，其浓度范围分别为：IL-3，2～100 ng／ml；SCF，2～200ng／ml。单个核 计数和分析检测粒单系集落形成单位(CFU—GM)，同时加入0 和细胞因子的新鲜培养液。 1．3CFU-GW检涌法 原始细胞接种密度为5x104个单个核细,llPJml，培养后的细胞每孔取25 i．tlx3做半固体培养。 半固体培养在24孔板中进行，每孔加入半固体培养基450 I．tl。半固体培养基组成为：含0．9％甲