RP-HPLC测定复方鳖甲软肝片中主要化学成分人参皂式Rg1含量.pdf

RP．HPLC测定复方鳖甲软肝片中主要 化学成分人参皂甙R91含量 蔡光明 韩晋 张苏刚 (解放军三0二医院药理研究室北京100039) 1前言 复方软肝片为我院临床科专家根据中医辩证施治的原则在积累多年临床肝炎、肝硬化 治疗验方的基础上经过反复筛选研制的非标准制剂。经过努力，该药物已于1999年3月 份由国家正式批准为三类新药并获新药证书．该药属中药复方制剂，具有舒肝活血、软坚 散结、提高蛋白、抗肝纤维化、增强免疫机能等功效。临床用于治疗早期肝硬化、慢性肝 炎具有显著疗效。该药组方中中药成分多。化学成分十分复杂。本文目的在于为复方软肝 片质量、稳定临床疗效，同时也为开展药理药效学研究提供定量的科学数据。实验采用 }Ⅱ，Lc，以矿(1J 2一二氯乙烷)：矿(正丁醇)：y(甲醇)：r(水)=3：3．5：1．5：2．0为流动相测定了 复方软肝片中主要化学成分人参皂甙1吨l。方法先进、灵敏、准确度高、操作快速、简便 省时、省力。方法回收率高(99．5％，梢；RSD=1．85㈨，测定结果：复方软肝片中人参 皂甙Rgl平均含量为1．373％，n=3。本文结果对建立复方软肝片的质控标准具有一定的 参考意义。 2仪器与试剂及药品 2．1仪器 处理机，HAMILPNA820砌忆5uL。 2．2试剂与药品 复方软肝片．由三O二医院药局制剂室生产9s0614等3个不同生产批号；人参皂甙 Rgl标准品，由中国药品生物制品检定所提供：甲醇，色谱纯(浙江黄岩化学实验厂)；正 丁醇，分析纯(北京化学试剂厂生产)；1，2．二氯乙烯，分析纯(北京化学试剂厂生产)：95％ 乙醇，分析纯(北京化学试剂厂生产)：超纯水(自制)。 3实验方法 3．1色谱条件 10 um纲柱，3．9mm×300mm；流动相：矿(1，2一二氯乙烷)：矿(正丁 色谱柱：upor∞i1 3．2标准品溶液的配制 准确称取人参皂甙R91标准品4．4mg，置于2南L容量瓶中以甲醇定容备用。 3．3样品溶液的制备 取软肝片若干片置于乳钵中研成细粉。准确称取软肝片细粉10Ing，加5倍量95％乙 ．40． 醇回流提取5次，每次提取时间分别为60，40，30．30min，过滤，合并提取液，回收溶 剂。浓缩物以甲醇溶解，过滤，溶液通过c。样品处理小柱，然后将柱后收集液移至10mL 容量瓶中以甲醇定容，为软肝片样品溶液。每1mL样品溶液中含软肝片粉lg。 3．4人参皂甙R91标准曲线的制备 以25 pL微量进样器取标准品溶液4，8，12，16，20 uL进样，以峰面积积分值为纵 坐标，标准品溶液体积数为横坐标作图。线性关系良好，计算回归方程为ctO．526+O．710n r=0．9985。 3．5回收率的测定 准确称取软肝片细粉109，加入人参皂甙R91标准品15mL，然后依照“软肝片样品 溶液”制备方法操作制备提供试液，在相同色谱条件下进样分析，计算平均加样回收率为 97．5％(”=5)．RsD=1．85％。 3，6软肝片样品测定 精确吸收软肝片样品溶液lmL置于5mL容量瓶中，以甲醇定容备用。以微量进样器 进样10 HL，外标法定量，测定结果表明，3批样品测得软肝片中人参皂甙Rgl的含量分 别为1．39％．1．42％和1_31％，兄妒分别为1．44％，1．60％和1．28％。 3．7系统精密度试验 在相同色谱条件下精确吸取人参皂甙R91标准品溶液10儿进样，测定标准品的色 谱的面峰积积分值。计算结果表明，方法所选择的色谱条件稳定．结果重现好性好， R泄1．25％。n=5。 4结论 (1)三七为复方软肝片的组方成分之一，是常用的活血化瘀药。近来文献报道三七具 有类似人参总皂甙的生理活性，人参皂甙R91为其中皂甙成分之一。对三七单味药材与复方 制剂中的有效成分的含量测定通常采用薄层色谱法、棒状薄层层析法、树脂吸附分离。比色法 等。作者采用高效液相色谱法，以y(1，2-二氯乙烷)：矿(正丁醇)：y(甲醇)：y(水)-3：3．5：1．s：2．0(下 层)为流动相，紫外检测，检测波长^。“．275nm，测定了复方软肝片中人