生物工业分析 教学课件 作者 罗建成 主编 李晓华 主审 第三章.ppt

尚辅网 尚辅网 尚辅网 物理分析法 　　2．味精纯度的测定 　　 （1）原理 　　味精为L－谷氨酸单钠盐。L－谷氨酸分子具有不对称碳原子，故具有旋光性。在水溶液中，比旋光度, 在2mol/L盐酸溶液中为+32。L－谷氨酸在盐酸溶液中的比旋光度在一定盐酸浓度范围内随酸度增加而增加，在测定味精纯度时，加入盐酸使其浓度为2mol/L，此时谷氨酸钠盐以谷氨酸形式存在。在一定的温度下测定比旋光度，并与该温度下纯L－谷氨酸的比旋光度比较，即可求得味精中谷氨酸钠的百分含量，即味精纯度（％）。 尚辅网 物理分析法 　　（2）仪器 　　旋光仪、温度计。 　　（3）测定步骤 　　准确称取于98±1℃干燥5小时的味精样品10.000g，加40～50mL水溶解，搅拌下加入浓盐酸20mL，使其全部溶解，冷却至室温，用水定容至100mL。 　　旋光计零点校正：有两种校正方法，一种为空白溶液校正法，即吸取20mL浓盐酸置入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，于旋光计上测定旋光度。另一种为空气法，即不用溶液和旋光管，空着仪器观测其旋光度。 　　将上述校正法所测得的旋光零点校正值在正式测定中加上或减去。 用少量样品溶液洗涤旋光管三次，然后注满一管，用干布擦干旋光管。 打开旋光计光源，稳定后校正零点。放入装好样品的旋光管记录旋光计的读数，并记录样液的温度。 尚辅网 物理分析法 　　（4）计算 式中：α——测得旋光度 　　　t——测量时样液的温度，℃； 　　　L——旋光管长度，dm； 　　　M——味精样品重量，g。 尚辅网 物理分析法 　　3．β-内酰胺类抗生素纯度的测定 　　β-内酰胺类抗生素分子中含不对称碳原子，具有旋光性，可通过测得的比旋度按以下公式求出供试品的纯度： 　　4．大麦淀粉测定 　　（1）原理 　　利用淀粉具有旋光性，在一定条件下旋光度的大小与淀粉的浓度成正比。用氯化钙溶液提取淀粉，使之与其它成分分离，用氯化锡沉淀提取（分离）液中的蛋白质后，测定旋光度，即可计算出淀粉含量。 尚辅网 物理分析法 　　（2）仪器 旋光计。 　　（3）试剂 ①氯化钙溶液：溶液546gCaCl2·2H2O于水中并稀释到1000mL。调整相对密度为1.30（20℃），再用1.6%醋酸调整pH为2.3～2.5，过滤后备用。 　　②氯化锡溶液：溶解2.5g SnCl4·5H2O于75mL上述氯化钙溶液中。 　　（4）操作步骤 　　样品研磨并用40目以上的标准筛过筛后，称取2g样品，置于250mL烧杯中，加水10mL，搅拌使样品湿润，加入70mL氯化钙溶液，盖上表面皿，在5min内加热至沸并继续加热15min。加热时随时搅拌以防样品附在烧杯壁上。如泡沫过多可加1~2滴辛醇消泡。迅速冷却后，移入100mL容量瓶中，用氯化钙溶液洗涤烧杯上附着的面粉，洗液并入容量瓶中。加5mL氯化锡溶液，用氯化钙溶液定容，混匀，过滤，弃去初滤液，收集滤液装入观测管中，测旋光度。 尚辅网 物理分析法 　　（5）计算 式中：α——样液测得的旋光度； 　　　L——观测管长度，dm； m——样品质量，g； 　　203——淀粉的比旋光度。 尚辅网 物理分析法 第四节　其它物理分析方法 　　一、华勃氏呼吸仪的构造及应用 　　1．华勃氏呼吸仪的构造 　　华勃氏呼吸仪结构如图3-17。 图3－17　华勃氏呼吸仪检压计及反应瓶 尚辅网 物理分析法 　　工作过程如下：测定前，将一定体积的试样及缓冲液置于反应瓶主室中，一定体积的酶液置于侧室，连接反应瓶与检压管，将检管管置于恒温水槽上，反应瓶浸入恒温水浴中。打开闭口端三通活塞，使与大气相通，旋动螺旋压板，调节检压管两端液面，使升至较高刻度处，此时由于两端液面都通大气，承受的压力相同，故两端液面的高度一致（图3-18a）。关闭三通活塞，使检压管右侧形成密闭系统，旋动螺旋压板，使闭口端液面下降至150mm刻度处（这一点为读数的参比点），此时闭口端液面所承受的压力为密闭系统中气体的压力，它小于大气压，而开口端仍与大气压平衡，这样开口端液面必然下降至低于闭口端液面，记录此时左侧管液面的刻度h1（图3-18b）。 尚辅网 物理分析法 　　倾侧检压管，使反应瓶侧压室内的酶液流入主室，与试样发生脱羧反应生成二氧化碳，由于二氧化碳的不断生成，密闭系统中气体的压力不断增加，从而将闭口端液面不断压低。待反应完毕，压力不再变化时，旋动螺旋压板，将闭口端液面仍调至150mm参比点处，使密闭系统保持与反应前相同的容积，此时闭口端液面所承受的压力比反应前大，故开口端液面必然上升（图3－18c），记录此液面刻度h２，h２－h 1即为反应前后一定容积的密闭系统中气体压力的变化。只要知道此