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尚辅网 尚辅网 第十八章 重组DNA技术 第一节 重组DNA技术的重要工具酶 一、限制性核酸内切酶 二、其他重要工具酶 一、限制性核酸内切酶 1. 限制酶的分类 2. 限制酶的命名 3.限制酶的识别位点 1. 限制酶的分类 2. 限制酶的命名 3.限制酶的识别位点 3.限制酶的识别位点 二、其他重要工具酶 第二节 重组DNA技术常用的载体 一、载体的分类 二、常用的载体 一、载体的分类 二、常用的载体 1. pMD18-T质粒载体 2.pCMV-Myc质粒载体 3.λ噬菌体 1. pMD18-T质粒载体 2.pCMV-Myc质粒载体 3. λ噬菌体 3. λ噬菌体 第三节 重组DNA技术常用的基本原理 一、目的基因的获取 二、目的DNA与载体的连接 三、重组DNA导入宿主细胞 四、重组DNA的筛选与鉴定 五、重组DNA在宿主细胞中的表达和调控 一、目的基因的获取 1. 化学合成 2. 基因组DNA文库 3. cDNA文库 4. 聚合酶链反应 1. 化学合成 2. 基因组DNA文库 3. cDNA文库 4. 聚合酶链反应 二、目的DNA与载体的连接 ㈠ 粘性末端连接 ㈡ 平头末端连接 ㈢ 同源多聚尾连接 ㈣ 人工接头法 ㈠ 粘性末端连接 ㈡ 平头末端连接 ㈢ 同源多聚尾连接 ㈣ 人工接头法 三、重组DNA导入宿主细胞 四、重组DNA的筛选与鉴定 ㈠ 直接选择法 ㈡ 限制酶切鉴定 ㈢ PCR筛选重组体 ㈣菌落原位杂交 ㈠ 直接选择法 ㈡ 限制酶切鉴定 ㈢ PCR筛选重组体 ㈣菌落原位杂交 五、重组DNA在宿主细胞中的表达和调控 ㈠ 重组DNA在原核细胞中的表达 ㈡ 重组DNA在真核细胞中的表达 ㈠ 重组DNA在原核细胞中的表达 ㈡ 重组DNA在真核细胞中的表达 第四节 重组DNA技术在医学和制药工业中的应用 1. 生产蛋白质类药物 2. 疫苗生产 3. 基因治疗 1. 生产蛋白质类药物 2. 疫苗生产 3. 基因治疗 尚辅网 尚辅网 图18-8 同一限制酶切割位点连接 尚辅网 图18-9 不同限制酶切割位点连接 尚辅网 尚辅网 尚辅网 图18-10 同源多聚尾连接 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 图18-13 α-互补筛选 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 * 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 尚辅网 图18-5 建立基因组DNA文库的基本过程 尚辅网 尚辅网 尚辅网 图18-6 建立cDNA文库的基本过程 尚辅网 尚辅网 * * * * *
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