生物制药工艺学 教学课件 作者 吴晓英 主编 郭勇 主审 第四章 多肽与蛋白类药物.ppt

尚辅网 尚辅网 尚辅网 （四）胰岛素（Insulin）－说明与讨论 （5）碱化时pH控制在8.2-8.4，pH低了除碱性蛋白不完全，且不易过滤，但在碱性条件下，胰岛素不稳定，其蛋白分解酶活力增加，因此pH不应过高，操作应尽快进行。 （6）浓缩能直接影响胰岛素的收率，采用离心薄膜浓缩，能缩短受热时间，避免效价损失。 （7）浓缩除去乙醇后，油脂与水呈乳浊液，采取速热速冷，先热后冷，可将乳浊液破坏分成两相，分离油脂，也可除去部分杂蛋白。 尚辅网 （四）胰岛素（Insulin）－说明与讨论 （8）在常规的结晶胰岛素中，尚含有一些杂蛋白抗原成分，如胰岛素原，胰高血糖素等。美英药典主要控制两个指标，即分子量大于胰岛素的蛋白质和胰岛素原,（胰岛素原等大分子杂质使病人使用后出现付作用，产生抗体引起皮下脂肪萎缩）。 用超细sephadexG-50凝胶过滤，可使结晶胰岛素进一步纯化。 尚辅网 （四）胰岛素（Insulin）－说明与讨论 （9）胰岛素制剂，有速效、中效、延效三种类型。 新剂型：眼用膜剂，鼻腔给药的气雾剂、直肠用栓剂、以及口服的脂质体、微囊、乳剂、微型缓释泵等。 （10）胰岛素结构修饰。 （11）酶促半合成人胰岛素 经胰蛋白酶的转酰胺作用，将猪胰岛素转化为人胰岛素。 尚辅网 （四）胰岛素（Insulin）－说明与讨论 （12）重组DNA技术制造人胰岛素 ①AB链合成法 ②反转录法 尚辅网 AB链合成法 尚辅网 尚辅网 重组人胰岛素的制备: ①AB链合成法 以人工合成的人胰岛素A链和B链基因，分别插入克隆载体质粒所携带的β–半乳糖苷酶基因中，再将重组质粒导入大肠杆菌，在细胞中进行复制，并在β–半乳糖苷酶基因的信号序列的控制下，合成mRNA，再翻译出A链和B链蛋白，用溴化氢（CNBr）将A链和B链联接起来组成人胰岛素（见图4-3）。 尚辅网 重组人胰岛素的制备: ②反转录酶法 如图4- 4 所示，通过胰岛素原的cDNA合成人胰岛素。先将mRNA经反转录酶处理合成cDNA，用化学合成法把甲硫氨酸密码子（ATG)接在胰岛素原cDNA的5’-末端，再将此基因插入pBR322质粒载体并转入大肠杆菌中增殖，除连接物甲硫氨酸使胰岛素原从融合的蛋白中释放出来。胰岛素原折叠成三维结构，并形成二硫键，再经工具酶切开，除去C-肽，即可获得人胰岛素。 尚辅网 （四）胰岛素（Insulin）－检验方法 效价测定： 药典采用的是家兔血糖降低法（与标准品对照）。 尚辅网 （四）胰岛素（Insulin）－作用与用途 Insulin是调节血糖水平的重要激素，能使血糖降低。主要用于治疗Insulin依赖型糖尿病以及糖尿病引起的其它病症和精神分裂症的休克疗法。 尚辅网 （五）生长素（GH） hGH是垂体前叶分泌的一种促进生长的蛋白类激素。由191个氨基酸组成，含两个-S-S-，MW21700，pI4.9，N端1～134个氨基酸段为活性所必需，C端一段可能起保护作用，相当稳定，室温下可放置48h。 有明显的种属特异性, 只有灵长类的生长激素对人有活性。 尚辅网 （五）生长素（GH） 生产工艺：基因工程法制备hGH 合成hGH基因，构建表达载体，细菌转化和表达hGH，提取、纯化，成品。 表达系统包括大肠杆菌、枯草杆菌、哺乳动物细胞。还开发出一种转基因小鼠的原型生长系统，从鼠乳汁中获得hGH，每1L乳汁中含0.6g hGH 尚辅网 （五）生长素（GH） 检验方法：生物测定 作用与用途： hGH有促进骨骼、肌肉、结缔组织和内脏增长的作用，对因垂体功能不全而引起的侏儒症有效。还用于身材矮小，伤口愈合、烧伤、软骨生长、骨折愈合等。 另外人生长激素受体拮抗剂可用于治疗巨人症，另外有可能可用于防止糖尿病并发症，已进入临床应用阶段。 尚辅网 （六）胃膜素 从猪胃粘膜中提取的一种以粘蛋白为主要成分的药物，用于胃、十二指肠溃疡和胃酸过多。 尚辅网 （七）绒毛膜促性激素（HCG） 从孕妇尿中提取，用于习惯性流产、治疗不育症。 尚辅网 （八）白细胞介素-2（IL-2）－结构与性质 IL是一类淋巴因子，已发现有十多种，其中IL-1～6研究得较多 IL-2由活化的淋巴细胞所产生，含133个氨基酸的糖蛋白，分子量15420。hIL-2的第58位和105位的两个半胱氨酸之间形成-S-S-。对其构象和微生物学活性有重要的作用。 IL-2在较宽的pH范围内（pH2.0～9.0）具有良好的稳定性。 尚辅网 （八）白细胞介素-2（IL-2）－生产工艺 用鸡瘟病毒和PHA联合刺激人外周血白细胞（诱生）而制备。基因工程法生产IL-2已用于临床。 尚辅网 重组IL-2及改造 应用蛋白质工程技术在IL-2中125位 Cys分别由 Ser或 Ala取代，可制成生物活性、热稳定性和复性效果都比原强的新