生物制药工艺学 教学课件 作者 吴晓英 主编 郭勇 主审 第五章 酶类药物 酶类药物.ppt

尚辅网 尚辅网 尚辅网 4.溶菌酶（EC3.2.1.17）－生产工艺1 溶菌酶生产工艺 尚辅网 4.溶菌酶（EC3.2.1.17）－生产工艺2 尚辅网 4.溶菌酶（EC3.2.1.17）－应用 1.在食品中的应用 溶菌酶在人乳中含量相当高。溶菌酶是婴儿生长发育必需的抗菌蛋白。所以溶菌酶是婴儿食品、婴儿配方奶粉、饮料等良好的添加剂。溶菌酶添加牛乳，可使牛乳人乳化，提高了牛乳的营养价值。 因为卵清溶菌酶是无毒的蛋白质，能选择性地使目标微生物细胞壁溶解，人们利用它来代替有害健康的化学防腐剂如苯甲酸，以达到保存食物的目的。 可用于肉制品、糕点、海产品、饮料等的保鲜、防腐 尚辅网 利用溶菌酶保鲜杨梅的实验 左：溶菌酶组；右：对照组。 尚辅网 4.溶菌酶（EC3.2.1.17）－应用 2?.在医药临床中的应用 溶菌酶是一种具有杀菌作用的天然抗感染物质，有抗菌、抗病毒、止血、消肿、镇痛、加快组织修复等功能，还有增强免疫力、激活血小板的功能，且对人体无任何毒副作用，具有良好的医疗效果和广阔的应用前景。 临床上，溶菌酶适用于五官科各种炎症，亦用于治疗扁平疣、传染性软疣、寻常性疣、尖锐湿疣等多种皮肤病。此外,可用溶菌酶来制眼药水、润喉液等,因此溶菌酶是一种较为理想的药用酶。 另外，临床上还把人体溶菌酶的浓度作为多种疾病的诊断标准。 尚辅网 4.溶菌酶（EC3.2.1.17）－应用 3?.在生物工程中的应用 溶菌酶是生物工程中必不可少的工具酶。一般应用溶菌酶进行菌体或细胞破壁提取细胞内容物（如原生质体等）应用于融合育种，或生产蛋白质、核酸类呈味物质。 在环境工程中也用溶菌酶处理污水、污泥。 尚辅网 5. L-天门冬酰胺酶 L-天门冬酰胺酶是从大肠杆菌菌体中提取分离的酶类药物，白色粉末，微有湿性，溶于水，不溶于丙酮、氯仿、乙醚和甲醇。 最适pH8.5，最适温度37 ℃。 尚辅网 5. L-天门冬酰胺酶 最早是从1953年从豚鼠血清中发现的，为酰胺基水解酶，专一地催化天冬酰胺水解形成L-天门冬氨酸和氨， 肿瘤细胞本身不能合成天冬酰胺，需依赖宿主供给，外源性天冬酰胺酶能使血液中天冬酰胺分解成天冬氨酸，从而使肿瘤细胞缺乏天冬酰胺而不能合成蛋白质，从而达到抗肿瘤目的，主要用于治疗白血病。 尚辅网 5. L-天门冬酰胺酶－生产工艺 尚辅网 5. L-天门冬酰胺酶－工艺过程 ①菌种培养： 大肠杆菌A.S.1.375，普通牛肉培养基，接种后于37℃培养24h。 ②种子培养： 16%玉米浆，接种量1%～1.5%，37℃，通气搅拌培养4～8h。 ③发酵： 玉米浆培养基，接种量8%，37℃通气搅拌培养6～8h。 尚辅网 5. L-天门冬酰胺酶－工艺过程 ④菌体干粉制备： 离心分离发酵液，得菌体，加2倍量丙酮搅拌，压滤, 滤饼过滤，自然风干成菌体干粉。 ⑤提取、沉淀、热处理： 每千克菌体干粉加0.01mol/L的pH8的硼酸缓冲液10L，37℃保温搅拌1.5h，降温到30℃以后，用5mol/l HAc调节pH4.2～4.4，进行压滤，滤液中加入2倍体积的丙酮，放置3～4h。过滤、收集沉淀、自然风干，即得干粗酶。 ⑥精制、冻干 尚辅网 6.超氧化物歧化酶（SOD） 是一种重要的氧自由基清除剂，催化超氧阴离子自由基歧化为H2O2和O2： 机体内存在一套解毒系统，从而保护机体免受损伤 尚辅网 6.超氧化物歧化酶（SOD） SOD属金属酶，按金属离子种类不同：分为Cu、Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD。 Cu、Zu型存在真核细胞。Fe型存在于原核细胞。Mn型存在于真核和原核细胞中。除了动物、微生物有SOD ，植物也有SOD。 哺乳动物中的SOD主要分布在肝、肺、肾、红血球等器官和组织。 SOD在体内血中半衰期为6～9min 尚辅网 6.超氧化物歧化酶（SOD）－结构 对Cu、Zu-SOD研究的比较多，Cu和Zn与必需基团His(组)形成咪唑桥。Cu与4个His及1个H2O配位，Zu与3个His和1个Asp（门冬）配位，构成活性中心。 尚辅网 6.超氧化物歧化酶（SOD）－结构 尚辅网 6.超氧化物歧化酶（SOD） 实验表明， Cu与Zn的作用是不同的， Zn仅与酶分子结构有关，而与催化活性无关，而Cu与催化活性有关，透析去除Cu则酶活性全部丧失。 Cu、Zn-SOD分子量为32000，由153个氨基酸组成，由二个亚基组成。对pH, 热比较稳定。人的Cu、Zn-SOD的遗传基因在第21条染色体上。 尚辅网 6.超氧化物歧化酶（SOD）－生产工艺 超氧化物歧化酶（SOD）生产工艺 尚辅网 6.超氧化物歧化酶（SOD）－应用 （1）治疗用药（炎症、辐射病、自身免