脑微血管内皮细胞条件培养液对体外培养正常神经元的影响.pdfVIP

世界科学技术～中医药现代化★基础研究 摘 要：目的：探讨体外模拟脑缺血再灌注损伤条件下及通络救脑注射液干预下脑微血管内皮细 胞条件培养液fcMEcs—CM)对体外正常培养神经元的影响。方法：先分别进行大鼠大脑微血管内皮细 胞和神经元的分离纯化培养及建立体外模拟脑缺血再灌注损伤模型，然后用收集的CMECs—CM 1： 1和 1：5的浓度作用于体外培养的神经元，MTT法测定神经元的活性、存活率，western—blot检测 NF—KB的表达。结果：脑微血管内皮细胞条件培养液可影响神经元生存活性 ，应用中药通络救脑注 射液作用于脑微血管内皮细胞后收集的条件培养液可明显提高神经元的生存活性，可以提高神经元 中NF—KB的表达。 关键词：脑微血管内皮细胞 神经元 脑缺血再灌注 条件培养液 血脑屏障 (blood—brainbarrier，BBB)是 中枢神 少明确提出药物通过何种环节和方式发挥作用 ，探 经系统特有的结构 ，其最基本的形态基础是微血管 讨脑微血管内皮细胞对神经元的调控作用，可为寻 内皮细胞，与周围基膜、周细胞、星形胶质细胞及神 找中药尤其是不能透过血脑屏障中药发挥脑保护作 经元共同组成了神经血管单元 (NVU)。脑微血管内 用的靶点和机制开辟新的视野 。 皮细胞 、星形胶质细胞和神经元在脑 内紧密接触形 一 材料与方法 成一个功能单元 ，对中枢神经系统的发育 、脑血流 分布和维持 中枢神经系统 内环境的稳定发挥着重 1． 坠 要作用[]。近年来微血管内皮细胞的功能受到越来 雄性 Wistar大鼠、新生 Wistar大鼠(24h内)购 自 越多的关注，其强大的内分泌和旁分泌功能，对维持 北京维通利华实验动物中心，动物合格证号：SCXK 神经系统内环境的稳定有着重要的意义。中医药在 京 2006—0007。高糖 DMEM基础培养基 ：GIBCO公 治疗脑病方面有着明显的优势 ，但现代 中药研究很 司，马血清：美国GIBCO公司，阿糖胞苷 ：北京医科大 学实验药厂 ，多聚赖氨酸和噻唑蓝 ：SIGMA公司，其 收稿 日期 ：2007—09—18 它试剂均为国产分析纯。 修 回日期：2007—12—20 女 国家 9“73”J；g~(2005CB523311)：通络方药对脑缺血损伤的脑组织保护作用的微血管机制研 究，负责人：李澎涛；国家 自然科学基金课题 ：从络脉论治脑神病的生物学基础研究，负责人：李澎涛；国家 “十一五”支撑计划 (2006BA108B05—04)：基于脑微血管内皮细胞功能 物质发现的脑病药物筛选与效应分析新技术，负责人：李澎涛。 女女 联系人：李澎涛，教授 ，本刊学术副主编，博士生导师，主要研 究方向：神经病理学与实验方剂学研究，Tel：010Email：LPTao@263．net．。 r 0蒯 ScienceandTechnology~ModernizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedica] 43 2098 第十卷 第四期 *Vo1．10No．4 2． 坠 体缺血，药物干预组造模前预用药6h，方法同正常干 (1)脑微血 管 内皮细胞 的培养和其条件液 的 预组。造模时弃去完全培养液，以D—Hank’S冲洗细胞 收集 。 2遍 ，换 Kreb’S溶液 (NaC1119mmol几、KC14．7 ①脑微血管内皮细胞(CMECs)的培养。 mmol／L、KH2P04 1．2mmol／L、NaHC03 25mmo]／L、Ca— 雄性 Wistar大鼠lO只