反相高效液相色谱法柱后调节PH胶束增敏荧光检测四环素类药物的研究.pdfVIP

维普资讯 第 l3卷第 5期 色 Vo1．13 No．5 1995年 9月 CHINESEJOURNALOFCHROMATOGRAPHY Sept． 1995 ；l～jf 反相高效液相色谱法柱后调节pH n 胶束增敏荧光检测 四环素类药物的研究 ． (河北大学理化分析研…究中心 保定 071002) f／^ ／、3 H 担耍 研究了适于分离捡测四环素类药物的高技液相色谱荧光捡测方法 为提高分析灵敏度+使用了柱后调节 pH技术。探讨 了pH 以及腔柬浓度对荧光强度 的影响。四种药物的橙 出限 8．O～75．60 的水平 ． 羌奠词 反相壹望 塑墨堂法，!堕 ，耋些堡型，柱后pH调节，胶束 l 前言 合室中与pH 为 3．2的柱漉出液混合，混合液的pH 在药物分析中+对 四环紊类药物的分析一直是 被调节为 10．7，此值 由荧光检测池后安装 的 pH测 使人注 目的研究课题。应用高效液相色谱分析 四环 量池 (自制，体积小于 lmL)测出，还可在线监测柱 紊类药物已有报道 。+其灵敏度多处于ng级水平 后的pH变化。荧光检测的激发波长为 385nm，发射 近期已有荧光检测的文献发表 ，由于使用了高聚 波长为 470nm。应用此条件获得四环紊类药物 的标 物 多孔微球 C 键合相柱，在流动相 pH 高达 12条 准混合物色谱图，见图 1 件下，测定了金霉紊。本文使用常规的反相色谱条 件，结合柱后调节pH及胶束增敏 ，建立荧光检测方 法，进一步提高了灵敏度 。4种四环紊类药物同时测 定 ，检 出限达到 8．O～75．6pg。 2 实验部分 2．1 仪器 美 国Beckman 114M 型单柱塞高压输液泵 ，日 车 ShimadzuRF一535荧光 分光光度 检 测器，美 国 Rheodyne7125型进样 阀，美 国AldexE一120一S一2型 田 1 4种四环膏类莳 标准谭台 色谱田 柱后调节 pH 用输液泵，混合室 (自制)，GouldBS一 1．四环素 ，2．金l紊，3．脱氟四环素+ 271型单笔记录仪 ，pH测量池 (自制)。 4 脱木四环紊。色谱条件见正文。 2．2 试剂 3 结果和讨论 四环紊、金霉紊、脱氧四环紊和脱水 四环紊均 由 北京中国生物制品与药品检定所提供。演代十六烷 3．1 四环素娄茹袖 的分离 基三 甲胺、草酸、碳酸钾均为分析纯。甲醇为优级纯。 四环紊类药物分子 的可离解基 团，在反相 流动 石英三次重蒸馏水 。 相 中可以离解；控制藏动相的 pH小于 3．3时，只有 2．3 色谱条件 A环第 四碳原子上的二 甲氨基基团离解为一价正离 色谱柱 ：sHIMPACK Ca(5m，150×6．0rami． 子 口；它可与流动相 中的草酸根形成离子对，满足了 d．)。流动相为甲醇 r水 (43：57，．V／V)，用草酸词 改善分离之 目的。 节 pH 至 3．2，流量为 0．4mL／mln=在柱 后调节 pH 3．2 四环素娄药物的荧光植铡 溶液中古有浓度为 0．15mol／L的KCO。，并添加了 3．2．1 舟质 pH紊件对荧光强度的蓐响 浓度为 70mg／L 的演代十六烷基三 甲胺 (CTMAB)， 已知四环紊在碱性条件下可以实现荧光光度测 溶剂为三改蒸馏水。调节柱后溶液的流量，使其在混