用原子力显微镜研究阿莫西林对沙门氏菌和单核增生性李斯特菌的抗菌活性.pdfVIP

现代仪器() 二○一○年·第三期 用原子力显微镜研究阿莫西林对沙门氏菌和单核 增生性李斯特菌的抗菌活性* 1 1 2 1 1** 黄 训 金 花 严琼琼 蔡怀鸿 蔡继业 （1.暨南大学化学系  广州  510632） （2.暨南大学理工学院  广州  510632） - + 摘  要  目的 ：探测阿莫西林作用于沙门氏菌(G ) 和单核增生性李斯特菌(G ) 后2 种菌 体的形貌和生物力学特性的变化，探讨阿莫西林的抗菌活性和抗菌机理。方法 ：通过平 板菌落计数法测细菌的失活率，利用原子力显微镜 （AFM ）对药物作用后细菌的表面形 貌及细胞的硬度、粘附力做定性和定量分析。结果 ：平板菌落计数得，25 μg/mL 的阿 莫西林作用1h 后，沙门氏菌的失活率较李斯特菌的失活率大。AFM 测量显示，与低浓 度阿莫西林作用后，沙门细菌表面出现孔洞，而李斯特菌表面出现裂缝，力曲线测量显 示，药物作用后针尖和细胞壁之间的粘附力明显增加，而杨氏模量(E) 显著降低。结论： 结合AFM 图像可知形貌与生物力学特性的变化反映细胞壁的变化，细胞壁的成分由均 一性变为异质性从而导致细菌的粘附力增加即FnativeFamoxicillin ，药物作用破坏肽聚糖的交 联和完整性使得肽聚糖断裂，使得杨氏模量降低即En ativ eEam oxicillin 。通过以上分析进一 步探讨阿莫西林的杀菌机理和不同的细菌对阿莫西林的敏感程度。这些A F M 数据为 阿莫西林的临床应用提供可视化的数据支持。 关键词  阿莫西林 沙门氏菌 单核增生性李斯特菌 生物力学特性 原子力显微镜 沙门氏菌为革兰氏阴性肠道杆菌 ，在 自然界分 果为进一步探讨细菌对药物的敏感性及其抗菌机理 布广泛 ，是全球报道最多、世界最常见引发食源性 提供可视化依据 。 疾病暴发 的首要病原菌 , 可引发 胃肠炎 、伤寒 、副 [1] 1  材料和方法 伤寒等 。单核细胞增生性李斯特菌为革兰阳性无 芽孢杆菌 ，目前在病原学上已被世界普遍公认为一 1.1  材料 种人畜共患病和食源性疾病 的病原菌 , 能引起人 、 1.1.1  菌种 沙门氏菌 （Salmonella, Sal . ），单核 畜及禽类 的李斯特菌病 , 表现为脑膜炎 、败血症 、 增生性李斯特菌 （Listeria monocytogenes, Lm ）, 均 流产等症状 , 致死率高达 30 % 以上 , 对免疫缺损 购 自广州微生物研究所 。 的病人 , 致死率甚至高达 70 %[2 ，3] 。 1.1.2  主要试剂和仪器 阿莫西林钠 （amoxicillin ） 细菌与药物作用后形态结构和生物力学特性 的 购 自珠海联邦制药股份有限公司 ，磷酸盐缓冲溶液 , 变化有助于进一步研究药物的抗菌机制 。原子力显 LB 培养基 ，其他试剂均为分析纯。原子力显微镜 微镜 （AFM ）不仅可 以获得样 品超高分辨率 的形 （atomic force microscopy AFM, Auto Probe CP Re- 貌特征还能定量表征样 品的生物力学特性 （硬度 、 search 型产品 ）购 自美 国 Thermomicroscopes 公司。 [4] 1.2  不同浓度的amoxicillin与Sal.和LM的作用 粘 附力 ） 。通过 AFM 测量