组织工程骨在生物反应器内的构建与检测.pdfVIP

第47卷第4期 大连理3-大学学报 Vol47，No．4 2007年7月 0 0 7 JournalofDalian of Jul．2 University Technology 组织工程骨在生物反应器内的构建与检测 宋克东1， 杨志明2， 刘天庆“， 智 伟2， 李香琴1， 邓 力2， 崔占峰3， 孙相玉1， 马学虎1 (1．大连理工大学于细胞与组织工程研究室，辽宁大连1t6024； 2．四川大学干细胞与组织工程研究室．四川成都 6i004]； 3．牛津大学工程科学系，牛律OXl3PJ) 摘要：用经绿色荧光蛋白标记的新西兰鬼颅骨来源的成骨细胞复合到生物衍生骨支架材料 上，在新型旋转壁式生物反应器内三维构建组织工程骨，同时与静态培养环境中构建的结果 进行比较．每12h取样一次，培养至l周后结束．分别进行组织学、免疫组织化学和代谢产物 等分析．结果显示反应器中以两种密度接种和构建的组织生长良好，细胞仍保持正常的染色 体形态，并且厦应器中构建物的细胞扩增是静志培养的5倍．研究结果还表明，通过反应器 内部流体对流所产生的应力刺擞及其提供的三维培养环境，可提高成骨细胞碱性磷酸酶的活 性表达，从而完成成骨蛔胞触快速增殖与分化井缩短工程化组织的犄建对闻，本实验进一步 证实了骨组轵工程产业化的现哭可行性． 关键词：成骨细胞；生物反应器；生物衍生骨；绿色荧光蛋白；三维构建 中圈分类号：R782文献标识码：A 组织工程是一个涉及多种学科的交叉研究 数进行定量比较．因为在本文后续的工作中要使 领域，在活体组织及器官的移植和重建治疗方面 用本研究所构建出的工程化组织进行大量的动物 已经展示了良好的发展前景[1]． 实验，为了使植入实验动物体内的材料中的外源 本课题组已经在旋转壁式生物反应器 细胞与其内源细胞相区别，本文对成骨细胞进行 (RWVB)内针对工程化组织的三维构建进行了 绿色荧光蛋白(GFP)标记．本研究旨在探索一种 一些有意义的探索口]．该研究对不同构建体系中 缩短工程化组织的构建时间、降低其制造成本来 SD大鼠成骨细胞黏附支架材料的整合性能及细 加速其广泛临床应用的方法． 胞新陈代谢情况进行了分析，并对构建物分泌胞 1 材料和方法 外基质和形成钙化结节的能力进行了比较，但是 此项工作侧重的是体外研究，培养周期较长(3 1．1材料 周)，而临床对骨组织构建物体外培养的时间要求 一般为1周，并且临床应用上对体外构建的工程 骨组织的安全性等方面还需进行更多的参数检 测．因此，有必要对RWVB内构建工程化组织进Amary1000B扫描电镜，JEM21005透射电镜， Elite 行更深层次的探讨． Epics S 本研究着重分析在RWVB内构建1周的工司)，Vitr 程化组织的各项生物学指标，检测经由RWVB构 建的新西兰兔成骨细胞在染色体水平上的变异情 况，并对两种不同构建方式下成骨细胞的扩增倍 壁式生物反应器(RWVB，大连理工大学干细胞 牧稿日期：2006—0