腺苷酸激酶与抗腺苷酸激酶单克隆抗体McAb3D3相互作用的研究.pdf

博士论文 致 谢 致 谢 三年的学习生活即将结束了.回首这三年时光，感受颇多 刚进入 实验室的兴奋还历历在 目，三年的酸甜苦辣更是深留在记忆中 看到 自 己的汗水和老师们的心血化成的成果，心底里充满了幸福和感激之情。 能在邹承鲁先生领导下的实验室从事研究工作令我深感荣幸.邹承 鲁先生渊博的知识、敏锐的洞察力和创新精神，给我留下深刻的印象。 感谢周绮梅研究员对我工作的精心指导.周老师严谨的治学态度、 敏锐的思维方式和娴熟的实验技巧使我受益匪浅。周老师豁达的生活态 度和坦诚的为人之道是我学习的典范。能够成为周老师的学生，我感到 自己是幸运的。在此，谨向周老师表示深深的谢意. 另外，特别感谢北京大学生命中心的郭振泉老师.郭老师的平易近 人给我留下了很深的印象。在郭老师的实验室，我度过了一段快乐的时 光，也使我学到了很多的知识。 也感谢发玛西亚北京技术中心的蒋美岩老师、邹卫博士和沈平博士 等的帮助，我的许多工作正是在他们的帮助下才得以顺利完成的。 衷心感谢周军贤老师在这三年中给我的慷慨帮助，这对我工作的顺 利开展是十分重要的。本组的张洪杰、范映辛、秦志杰和盛湘蓉等同学 给予我巨大的帮助，本室的其它老师和同学也都在各方面帮助过我，在 此我一起表示衷心的谢意。 研究生部的张允芝老师，我室田玉兰、刘江红、祁晓燕等对学生生 活和工作关心倍至，为我们的工作提供了许多便利，在此深表感谢! 致 谢 第 z页 博士论文 最后，感谢我的妻子。在这三年中，她始终如一地支持和鼓励我， 使我免去后顾之忧，专心于学业。我将这篇论文献给她，希望她能与我 一起分享这收获的喜悦。感谢我远方的父母和家人，正是他们的殷切期 望激励了我，给了我前进的信心和勇气。 前方的路还很长。我希望能够以此时作为我一个新的起点，在科学 的道路上奔向新的目标。 罗杰 一九九九年六月于北京 博士论文 第 3 页 摘 要 摘 要 本文应用生物传感器技术、常规和竞争 ELISA方法、专一性荧光标 记和滴定曲线一等电聚焦电泳等技术对堕.宜一to与其专一性单克隆抗体 McAb3D3在各种条件下的相互作用进行了系统的分析，探讨了被共价固 定、物理吸附以及溶液状态的腺昔酸激酶的构象差异及其与单抗McAb3D3 作用的稳态结合常数和动力学过程;对腺昔酸激酶在低浓度盐酸肛作用 下的构象状态及其与激活的关系进行了分析.通过这项研究，不仅增加 了对腺昔酸激酶与其专一性单克隆抗体的结合性质的认识，还发展了广 泛适用的生物传感器响应信号全上 局 数值积分分析方法，使AK与McAb3D3 的结合研究从稳态发展到动态。阵 主要研究内容包括以下五方面 几 1)利用光学生物传感器技术测定了腺昔酸激酶与抗腺昔酸激酶单克 隆抗体McAb3D3的相互作用。固定化腺昔酸激酶与溶液中抗体相互作用 的结合曲线能够用固定化配体不均一模型很好地拟合;而固定化抗体与 溶液中腺昔酸激酶相互作用的结合曲线符合假一级反应。这个结果表明 固定化的腺昔酸激酶是不均一的，这种不均一性可能来自化学固定过程。 通过增加固定配体的表面密度和降低流动相速度，证实在固定化腺昔酸 激酶与溶液中抗体结合的过程中存在解离抗体的重结合效应。固定化的 腺昔酸激酶与它的各种底物及底物类似物的结合能力明显降低的结果表 明固定化的腺昔酸激酶的构象发生了一定程度的变化。重结合效应和固 定化腺昔酸激酶的构象变化都导致了直接固相法测得的亲和常数不能反 映溶液中的真实结合情况。因此，利用竞争法测定了腺昔酸激酶与抗体 McAb3D3在溶液中的