血小板亲和萃取-HPLC分析法在栀子提取物抗血小板聚集效应物质分析中的应用.pdfVIP

2014　第十六卷　第九期　★Vol.16 No.9 世界科学技术—中医药现代化绎中药研究 血小板亲和萃取-HPLC 分析法在栀子提取物 抗血小板聚集效应物质分析中的应用＊ ＊＊ ＊＊ 郭青丽，杜守颖 ，陆 洋 ，李鹏跃，徐 攀，王 振，郭懿望，尚可心， 艳珂 （北京中医药大学中药学院 北京 100102 ） 摘 要：目的：应用血小板生物亲和萃取-HPLC 分析法分析栀子提取物中抗血小板聚集的活性成分， 并对活性成分进行药理实验，以验证血小板生物亲和萃取-HPLC 分析法在栀子提取物抗血小板聚集效应 物质分析中的可行性。方法：将栀子提取物在生理条件下与洗涤血小板相互作用，洗去非结合成分，调节 pH 破坏血小板结构后洗脱结合成分，将各洗脱液用已建立的指纹图谱方法进行 HPLC 分析，找出准活性 成分，并进一步对活性成分进行药理实验。结果：可检测到栀子提取物中的主要与血小板结合成分为栀子 苷，药理实验也进一步证实一定剂量范围栀子苷对由ADP 、鼠尾胶原及凝血酶诱导的大鼠血小板聚集具 有明显的抑制作用（P0 .01 ）。结论：血小板生物亲和萃取-HPLC 分析法可以用于分析栀子提取物与血小 板膜受体的相互作用，所筛 的活性成分与其药理作用有一定的相关性。 关键词：血小板生物亲和萃取-HPLC 分析法 栀子提取物 栀子苷 抗血小板聚集 doi: 10.11842/wst.2014.09.005 中图分类号：R284.1 ，R285.5 文献标识码：A 现代药理受体学说认为，药物进入机体发挥药 文采用血小板生物亲和萃取-HPLC 分析法来筛选 效，首先要与 细胞膜上的某些受体结合。血小板膜 栀子提取物活性成分，并进一步通过药理实验对其 上有多种受体，抗血小板的药物也多作用于其膜上 抗血小板聚集活性予以验证。 的受体，如凝血酶受体，ADP 受体等。目前，以生物 1 材料 细胞膜为固定相，保证其细胞膜的完整性、膜受体的 立体异构、周围环境以及 点，再特异性地与作用于 1.1 仪器 细胞膜的活性成分结合，来筛选以生物细胞膜为作 Agilent 1200 系列高效液相色谱仪，UV 检测器 用靶点的中药效应成分已有一些研究报道[1,2] 。 （美国Agilent 公司）；离心机（上海安亭科学仪器厂）；恒 栀子是茜草科植物栀子 Gardenia j asminoides 温振荡器 （太仓市豪成实验仪器有限公司）；LG - Eills 的干燥成熟果实。研究表明，栀子在心脑血管 PABER-1 血小板聚集凝血因子分析仪 （北京世帝科 系统方面有多种药理功效，如抑制血小板聚集[3] ，防 学仪器公司）；pHs-25 酸度计（上海伟业仪器厂）。 止动脉 样硬化等。本课题组前期已经建立了栀子 1.2 试药及试剂 及其提取物的HPLC 指纹图谱方法，在此基础上，本 栀子提取物（GE ，实验室自制，栀子苷含量约 40% ），栀子苷（中国食品药品检定研究院，批号： 收稿日期：2014-04-03 110749-201 115 ），考马斯亮蓝试剂盒 （南京建成生 修回日期：2014-04-15 元 科学技术部国家科技重大新药创制专项（2009ZX09502-008 ，2009ZX09308-003 ）：基于“脑络痹阻、毒损脑络”病机治疗老年性痴呆的三七、栀子组 分新药-SZ52（中药5 类），负责人：杜守颖；科学技术部国家重点基础研究发展“973 计划”（2012CB724001 ）：基于释药动力学的多组分缓控释给药 体系的评价方法研究-栀子，负责人：杜守颖；北京中医药大学创新团队（201 1-CXTD-13）：复方中药制药研究创新团队，负责人：杜守颖。 元元 通讯作者：杜守颖，教授，博士生导师，主要研究方向：中药新剂型与新技术；陆洋，副教授，硕士