浙江大学生物化学实验甲氨基移换反应及其产物的鉴定.pptVIP

氨基移换反应及其产物的鉴定 1、原理 氨基移换反应：在氨基移换酶（转氨酶）的催化 下，氨基酸的α-氨基和α-酮酸的α-酮基之间发生的 互换反应。 转氨酶的种类很多，任何一种氨基酸进行转氨作 用时都由其专一的转氨酶催化。转氨酶的最适pH接近 7.4，在各种转氨酶中，谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活 性最强。 本实验即利用纸层析法，通过检查α-酮戊二酸和 丙氨酸在谷丙转氨酶的作用下所生成的谷氨酸，来证 明组织内的转氨作用。有关原理如下： 氨基移换反应及其产物的鉴定 ⑴ 、转氨反应原理 ⑵、纸层析原理 纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。分配 层析是利用不同物质在两个互不相溶的溶剂中分配情 况（溶解度）的不同来分离混合物的一种技术。 氨基移换反应及其产物的鉴定 层析时展层溶剂由有机溶剂和水组成。吸附在滤 纸上的一层水分子为层析的固定相，与固定相不相混 溶的有机溶剂为层析的流动相。进行分离时由于被分 离物质的组分在两相中的分布不同，随着流动相的移 动，物质将在两相间进行连续的、动态的不断分配， 从而造成不同组分移动的速度也不相同。易溶于流动 相中的组分移动快，在固定相中溶解度大的组分移动 慢，于是得到分离。 物质分离后在滤纸上的位置可用比移值（Rf）来 表示。 氨基移换反应及其产物的鉴定 用滤纸层析法分离氨基酸，是根据氨基酸样品的 R基的化学结构或极性大小的不同，将样品氨基酸溶解 在适当的溶剂（水、缓冲液或有机溶剂）中，点样在 滤纸的一端，再选用适当的溶剂系统，通过毛细现象 向另一端展层，展层完毕后，用茚三酮作为显色剂， 即可得到氨基酸样品的分离图谱。 ⑶、茚三酮的显色原理 氨基移换反应及其产物的鉴定 2、实验材料及试剂 实验材料：新鲜动物肝脏 实验试剂：试剂的配制及注意事项参191。 3、实验步骤 操作过程及注意事项参192。 4、实验结果及处理 认真观察实验现象，并对层析后氨基酸的显色情 况进行分析。 * * COOH CH NH2 CH3 COOH C O (CH2)2 COOH COOH C O CH3 COOH CH NH2 (CH2)2 COOH + + 谷丙转氨酶 Ala α-KG Glu 展层后斑点中心与原点之间的距离 Rf = 原点与溶剂前缘间的距离 氨基酸 + 茚三酮 紫红色复合物 570nm处具特征光吸收，可 据此定量测定各种氨基酸 * * *