“血红蛋白的提取和分离”的解题指导.pdfVIP

生物 ·解题方略 。一、、 、 红蛋留的提取·和，分离’’ 的解题拍导 口李 伟 “血红蛋蛰白的提取和分离”是选修 I模块 保持溶液的pH基本不变。 生《物技术实践》中的实验内容，其 目的是使 3．凝胶 电泳 学生体验从复杂细胞混合物体系中提取生物 (1)原理：在电泳过程中，决定带电分子 大分子的基本原理、方法和过程。本节内容主 迁移方向的是带电分子带电性质的差异，决 要是能理解凝胶色谱法、电泳法的基本原理， 定带电分子迁移快慢的是带电分子形状、大 了解缓冲液的组成及其作用；掌握血红蛋白 小和电量的不同。 的提取与分离的基本过程和方法 ，并结合实 (2)分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯 验操作过程，分析实验和实验的注意事项。 酰胺凝胶电泳等 。 蘸 一 (3)分离过程：在一定的pH下，许多生物 、 实验原理及分析 大分子上可解离的基团就会带上正电或负电。 提取和分离蛋白质的原理：利用蛋白质 加入带负电荷多的SDS，形成 “蛋白质一SDS复 的各种理化特性 (如形状 、大小、电荷性质和 合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。 多少、溶解度、吸附性质、亲和力等)的差异， 4．实验操作 由此提取和分离各种蛋 白质。 (1)样品处理： 1．凝胶色谱法(分配色谱法 ) ① 红细胞的洗涤。 (1)原理：根据相对分子量的大小分离 洗涤的目的是除去血浆中的杂蛋白，以 蛋白质的一种有效方法 (分子量大的分子通 利于后续步骤的分离纯化。为防止血液凝固， 过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分 应预先加入柠檬酸钠；采集的血样要及时采 子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程 用低速短时间离心分离红细胞，然后用胶头 长，流动慢)。 吸管吸出上层透明的黄色血浆，将下层暗红 (2)凝胶材料：大多数是由多糖化合物 色的红细胞液体倒入烧杯。 (如葡聚糖、琼脂糖等)构成的微小多孔球体， ． 所用洗涤液是五倍于红细胞液的生理盐 如下图所示。 水；洗涤中用玻璃棒缓慢搅拌，用离心机低速 o(=)o审(=)oO审o(=)o(=)oo 短H-,J~心；洗涤干净的标准是上清液没有黄色。 ② 血红蛋 白的释放。 oOoOoOoOoOoo 释放的目的是将血红蛋白从红细胞中释 (3)作用：分离蛋 白质，测定生物大分子 放出来。在红细胞液中加入等体积的蒸馏水 分子量等。 和40％体积的甲苯，置于磁力搅拌器上充分 2