回归方程在转基因水稻Bt基因定量检测中引入的不确定度评估.pdfVIP

2013年3月 四川师范大学学报(自然科学版) Mar．，2013 ofSichuan 第36卷第2期 Journal Normal University(NaturalScience) V01．36。No．2 回归方程在转基因水稻Bt基因定量检测中 引入的不确定度评估 雍 彬1， 王 东2， 宋君孙， 雷绍荣2， 尹 全2， 张pr面-L-‘丽2， 刘文娟2， 常丽娟2 (1．四川师范大学生命科学学院，四川成都610101；2．四川省农业科学院分析测试中心，四川成都610066) 摘要：为了把测试分析误差控制在允许范围内，保证测试结果有一定的精密度和准确度，使分析数据在 给定的置信水平内达到要求的质量，根据JJFl059．1999((测量不确定度评定与表示》技术规范，采用抗虫转 Bt基因水稻定量PCR方法，测试“科丰6号”样品Bt基因的含量，初步评估了内标基因GOX和外源基因Bt 的校准曲线输出值的不确定度．检测结果平均值为5．3％，接近约定真值；回归方程在转基因水稻Bt基因定 量检测中引人的不确定度评估结果为0．027．Ct值的随机变化和标准曲线的非线性是回归方程引人的不确 定度的主要因素，因此，在转基因生物安全定量结果不确定度评定中，应重点讨论Q值变化与标准曲线非 线性的偏离． 关键词：转基因生物；定量PCR；回归方程；不确定度 中图分类号：0164 文献标志码：A 文章编号：1001—8395(2013)02—0284—05 doi：10．3969／j．issn．1001—8395．2013．02．027 水稻是世界主要粮食作物之一，全球大约有26 产品的外源基因定量检测是贯彻和实施这些规定 亿人以大米为主食．为了提高水稻抗逆能力和保障 的主要技术和手段．我国国家标准《检测和校准实 产量，科学家们从土壤微生物等其它生物体基因组 中克隆出抗虫、抗病、抗除草剂等基因，再转化到水 实验室至少应努力找出外源基因定量检测中不确 稻基因组中，从而使转基因水稻获得了更高的抗 定度所有的分量且作出合理评定，并保证结果的表 虫、抗病害及抗除草剂等能力．目前国外已经商业 达方式不会对不确定度造成错觉‘41．关于测量不确 化种植的转基因水稻主要有抗除草剂水稻LL广 定度的理论阐述∞q1和具体评估在理化检验中已 RICE06、LLRICE62(Avenfis 有大量报道旧。13|，但是对于转基因生物及产品中外 Cropscience研发，美国 源基因的定量检测的不确定度报道相对较 和加拿大分别于2000年和2006年开始商业化种 少一4—5i．本实验测定了转基因水稻“科丰6号”样 植)、PWCl6、CLl21、CLl41和CFX51(BASF公司 研发，2002年加拿大进行商业化种植)．近年，我国 品中Bt基因的含量，分析、评估了在转基因水稻Bt 转基因水稻研发也取得重大进展，于2009年发放 基因的定量分析中，由标准曲线拟合引入的不确定 了由华中农业大学研发的抗虫转基因水稻“华恢l 度，以期为转基因生物安全检测不确定度的评定提 号”、“Bt汕优63”的安全证书，但目前这2种转基供参考． 因水稻并未被批准商业化种植． 1材料与方法 我国《农业转基因生物安全管理条例》、《农业 转基因生物标识管理办法》等配套管理办法‘卜3|， 1．1 材料本实验以质量分数为100％的转基因 明确规定对进入我国流通市场的转基因