毛细管电泳分离-激光诱导荧光检测生物胺.pdfVIP

第36卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第1期 ChineseJoumalof 24～28 2008年1月 AnalyticalChemistry 毛细管电泳分离一激光诱导荧光检测生物胺 曹丽伟4 孟建新 刘咏娟 (暨南大学化学系，广州510632) 摘要采用新合成的6．氧一[(1．琥珀酰亚胺)氧酰甲基]一荧光素乙酯(sOFE)作为柱前衍生试剂，毛细管电 mmoL／LsDs 8．5的含25 8．5)中，室温(25℃)下衍生10min。用pH 6种生物胺。在硼酸一硼砂缓冲溶液(pH 15％(∥y)乙腈的40mmoL／L硼酸盐溶液作为电泳缓冲溶液，6种衍生物在15min内完全分离，检出限在 2．5×10。11～8×10‘11 moL／L之间。该方法应用于酱油中生物胺的测定，结果令人满意。 关键词 毛细管电泳，激光诱导荧光检测，生物胺，荧光衍生试剂 1 引 言 用于测定生物胺的最常见的方法有气相色谱(Gc法¨j、高效液相色谱(HPLc)法旧。和毛细管电泳 cE所有检测方法中灵敏度最高的方法之一【4J。目前，商品化的激光器中Ar+激光器(488nm)用得较多。 由于生物胺本身没有或者仅有较弱的荧光，通常采用衍生试剂进行衍生，使生成具有强荧光信号的 衍生物，达到高灵敏检测的目的。目前衍生胺类化合物的荧光试剂虽有50多种∞’7|，但是波长与488 nm激光诱导荧光(uF)检测器相匹配的为数不多。其中，以荧光素为荧光团的衍生试剂如荧光素异硫 其需要较长的衍生时问(12h)，且在cE分离中有较多的杂峰干扰旧j。DTAF在衍生中也产生较多的 副产物”]。此外，这些衍生试剂由于自身的荧光素结构的影响，荧光强度受pH影响较大，只有在碱性 条件下才有较强荧光，它们光稳定性也较差，具有5一和6．位的位置异构体，分离提纯非常困难，单个异 构体价格昂贵。因此，选择性能优良的适用于cE．LIF(488nm)这一高灵敏分析方法的衍生试剂对于胺 类化合物的测定具有重要的意义。 文献[9]报道了一种新活性酯类氨基荧光衍生试剂6．氧．[(1一琥珀酰亚胺)氧酰甲基]一荧光素乙酯 飞Q，。、／，N一：一A (SOFE，化学结构式为≮火．火∥扩)。研究发现，s0FE具有荧光强度受pH值影响较小、光稳定 ／≮一n 弋∥ 物胺的分析方法。实验发现，在室温下10min完成衍生反应。6种衍生物在15min内完全分离，检出 限为2．5×lo‘11～8×10—omoL／L。将该方法用于酱油中生物胺的测定，回收率为93％～10l％。该方法 简单、快速、灵敏度高、重现性好。sOFE是一种毛细管电泳-uF检测生物胺的性能优良的荧光衍生试剂。 2实验部分 2．1仪器与试剂 Beckman MDQ毛细管电泳仪，配488nm氩离子激光诱导荧光检测器，激发波长／发射波长： 488／520 nm。毛细管长57cm(50cm×75¨mi．d．)，石英毛细管(河北永年光纤厂)。分离温度： 200r7旬5_31收稿；2007旬8-22接受 本文系广东省博士启动基金资助项目(No．0630051) }E-mail：1wcao@126．com 万方数据万方数据 第1期 曹丽伟等：毛细管电泳分离．激光诱导荧光检测生物胺 25℃；进样方式：压力注射(3．45kPa)；进样时间：0．5s；进样量约为25nL。新毛细管分别用水、 1 moL／L moL／L moL／L Hcl、水活化30