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课题1　DNA的粗提取与鉴定 课程标准 本课题在课标中没有明确要求，但本部分内容与PCR技术和蛋白质的提取有一定联系。 课标解读 1.了解DNA分子的理化性质。 2.理解DNA粗提取与鉴定的原理。 3.掌握DNA粗提取技术。 1．提取生物大分子的基本思路 选用一定的 或 方法分离具有不同 的生物大分子。 2．提取DNA的思路：利用DNA与 、 和 等在 和 性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 3．原理 (1)DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的 溶液中溶解度不同。利用这一特点，选择适当的 就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目的。 (2)DNA不溶于 ，但是细胞中的某些蛋白质则溶于此溶液。 (3) 能水解蛋白质，但对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受 的高温，而DNA在 以上才会变性。洗涤剂能瓦解 ，但对DNA没有影响。 4．DNA的鉴定 在 的条件下，DNA遇二苯胺会染成 。注意二苯胺试剂要 。 [思维激活1] 为提取到DNA，曾先后使用不同浓度的NaCl溶液，则在质量浓度为2 mol/L NaCl溶液及0.14 mol/L NaCl溶液中应取滤液，还是滤得的固体物？ 提示　在质量浓度为2 mol/L NaCl溶液中DNA呈溶解状态，应取滤液，在质量浓度为0.14 mol/L NaCl溶液中DNA溶解度极低，易析出，应取固体物。 1．利用DNA的溶解特性粗提取DNA ①DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。 ②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可将DNA与蛋白质进一步分离。 2.利用DNA对酶、高温及洗涤剂的耐受性提取DNA(见下表) 特别提醒　(1)甲基绿可将DNA染成绿色，且不需水浴加热。二苯胺鉴定DNA属于颜色反应，需要水浴加热5 min，可使DNA呈蓝色。 (2)二苯胺试剂要现配现用，否则二苯胺会变成浅蓝色，影响鉴定效果。 【巩固1】 蛋白酶能将蛋白质水解而使染色质中的DNA分离出来。下列药品可达到上述同一目的的是 (　　)。 A．蒸馏水 B．NaCl溶液 C．NaOH溶液 D．盐酸 解析　蛋白酶是利用酶的专一性将DNA和蛋白质分离，而NaCl溶液则是利用DNA和蛋白质在该溶液中的溶解度不同将其分离。 答案　B 1．实验材料的选取 选用 含量相对较高的生物组织。 2．破碎细胞，获取含DNA的滤液 (1)动物细胞的破碎——以鸡血为例 在鸡血细胞液中加入一定量的 ，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集 即可。 (2)植物细胞的破碎——以洋葱为例 先将洋葱切碎，然后加入一定的 和 ，进行充分 和 ，过滤后收集研磨液。 3．去除滤液中的杂质 (1)方案一：通过控制 的浓度去除 。 (2)方案二：直接向滤液中加入 ，反应10 ～15 min，添加物中的 能够分解蛋白质。 (3)方案三：将滤液放在 的恒温水浴箱中保温10～15 min，注意严格控制温度范围，使 沉淀析出而 分子还未变性，可以将DNA与蛋白质分离。 4．DNA的进一步提纯 利用DNA不溶于冷却的 这一原理，可从溶液中析出较纯净的DNA，此时DNA的状态为 。 5．DNA的鉴定 将呈丝状物的DNA溶解于5 mL质量浓度为 溶液中，再加入4 mL的 试剂， 加热5 min，冷却后观察溶液的颜色。注意要同时设置 实验。 [思维激活2] 用猪的血液与鸡的血液提取DNA哪个效果更好？ 提示　用鸡的血液；因为