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@.微生物的实验室培养.ppt
微生物基础知识 细菌的外形与大小 细菌:单细胞不分枝的原核微生物。 细菌细胞微小而透明,通常用适当染料染色后显微镜观察 细菌的构造 细菌细胞由外向里依次有鞭毛、菌(纤)毛、荚膜、细胞壁、细胞膜、细胞质,细胞质中又有液泡、储存性颗粒、核质等。 *细胞壁 结构特点:坚韧且有弹性 细胞壁有哪些功能? ①固定细胞外形; 菌落: 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时,就会形成一个肉眼可见的,具有一定形态结构的子细胞群体,叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。 朊病毒(蛋白质病毒) 细菌的营养类型 根据细菌所利用的能源和碳源的不同,将细菌分为两大营养类型。 自养菌(autotroph) 异养菌(heterotroph) 腐生菌 寄生菌 大部分病原菌 选择培养基 4.培养基的用途 液体培养基:增菌 固体培养基:纯化,增菌 半固体培养基:动力检测,保种 (二)无菌技术 1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中,所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作,还是平板稀释涂布法,其操作中的每一步都需要做到“无菌”,即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作,才可能成功地培养微生物。 (1)消毒定义: 使用较为温和的化学或物理方法,仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)的过程。 2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 (2)灭菌的定义: 使用强烈的化学剂或物理方法消灭所有微生物,包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒,而达到完全无菌之过程。 灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。 1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法:70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 …… (1)消毒的方法: 3.常用的消毒与灭菌的方法 1、灼烧灭菌 2、干热灭菌:160-170 ℃下加热1-2h。 3、高压蒸气灭菌:100kPa、121 ℃下维持15-30min. (2)灭菌的方法: 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌,它可以杀灭所有的生物,包括最耐热的某些微生物的休眠体,同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌,特别是空气中的杂菌污染,试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口,通常采用棉花塞,也可采用各种金属、塑料及硅胶帽,它们只可让空气通过,而空气中的其他微生物不能通过。 而平皿是由正反两平面板互扣而成,这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的? 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要,请选择合适的方法。 (1) 培养细菌用的培养基与培养皿 (2) 玻棒、试管、烧瓶和吸管 (3) 实验操作者的双手 答:无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 答:(1)、(2)需要灭菌;(3)需要消毒。 3.微生物实验室培养的基本操作程序 1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存 三、实验操作 1.制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌) 1.计算、称量 2.溶化 3.调pH: pH7.6 4.过滤:这一步可以省去。 5.分装:分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 6.加塞 7.包扎 操作步骤 8.灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中,塞上棉花塞,包上牛皮纸,再放入高压蒸气灭菌锅,在压力为100kPa、温度为121℃,灭菌15~30min。将培养皿用旧报纸包裹,放入干热灭菌箱内,在160~170 ℃下灭菌2h。 9.倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时,在酒精灯附近倒平板。(倒平板操作见课本)2d后观察平板,无杂菌污染才可用来接种. 10.无菌检查: 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时,以检查灭菌是否彻底。 倒平板技术 1.培养基灭菌后,需要冷却到50 ℃左右时,才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度? 答:可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰? 答:通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后,为什么要将平板倒置?
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