安宫牛黄丸对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1基因表达及髓过氧化物酶活性的影响_临床医学论文.docVIP

安宫牛黄丸对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1基因表达及髓过氧化物酶活性的影响_临床医学论文 安宫牛黄丸对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1基因表达及髓过氧化物酶活性的影响_临床医学论文 作者：张丹,胡质毅,黄萍,李俊,王艳丽 【摘要】 【目的】观察安宫牛黄丸对盲肠结扎穿孔术致脓毒症模型大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA表达及髓过氧化物酶(MPO)活性的影响。【方法】75只雄性SD大鼠随机分为正常对照组,脓毒症模型组(CLP组),1α氰基羟基)N苄苯乙烯胺组[AG490组,术前0皮下注射8 mg/kg的Janusk激酶2(JAK2)抑制剂AG490],雷帕霉素(RPM)组[RPM组,术前0皮下注射0的信号转导和转录激活子(STAT)抑制剂RPM],安宫牛黄丸低、中、高剂量组(术前0和术后6 h按1、2、3剂量灌胃)。于造模后24 h活杀动物,留取肺组织,采用逆转录—聚合酶链反应(RT法检测肺组织HMGB1 mRNA表达水平,同时测定MPO活性。【结果】与正常对照组比较,CLP组肺组织HMGB1 mRNA表达显著增强(0活性显著增高(0。与CLP组比较,AG490组、RPM组以及安宫牛黄丸低、中、高剂量组HMGB1 mRNA表达显著下调(0组、RPM组以及安宫牛黄丸低、中剂量组MPO活性显著降低(0或0。【结论】安宫牛黄丸治疗脓毒症的作用与AG490、RPM等JAK/STAT信号通路抑制剂相似,可下调肺组织HMGB1基因表达,降低肺组织MPO活性,减轻腹腔感染所致的急性肺损伤。 【关键词】 安宫牛黄丸/药理学;脓毒症/中药疗法;基因表达调控;疾病模型,动物;大鼠 高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是严重感染所致脓毒症的重要晚期介质,参与了包括肺脏、肝脏、肠道在内的多器官损害过程[1-2]。肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性可定量反映肺组织中性粒细胞(PMN)扣押与聚集的数目,在一定程度上反映肺组织的炎症损伤程度[3-4]。本研究旨在观察盲肠结扎穿孔致脓毒症大鼠肺组织HMGB1 mRNA表达的变化规律，及安宫牛黄丸对肺组织HMGB1 mRNA表达和炎症损伤指标MPO活性的干预作用并探讨其可能作用机理,为寻找中医药干预脓毒症的有效途径提供依据。现报道如下。 　　1材料与方法 　　1主要药物、试剂与仪器安宫牛黄丸由北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂生产(批号：5010279),水合氯醛由国药集团化学试剂有限公司生产(批号,MPO活性检测试剂盒由南京建成科技有限公司提供(批号：071103),1α氰基羟基)N苄苯乙烯胺(AG490)为美国Alexis Biochemicals产品,雷帕霉素(RPM)为美国Alexis Biochemicals产品,总RNA提取试剂盒为日本TaKaRa公司产品，逆转录—聚合酶链反应(RT试剂盒为立陶宛Fermentas (MBI)公司产品，WFJ 7200型可见光分光光度计为尤尼柯(上海)仪器有限公司产品。 　　1动物模型制备健康雄性SD大鼠75只,体质量180～220 g,购自广东省医学实验动物中心,合格证号：0031637。在Wichterman[5]报道的方法的基础上进行改良,复制腹腔感染型脓毒血症。术前禁食12 h,用100 mg/L水合氯醛按15 mL/kg的剂量腹腔注射麻醉大鼠,常规消毒腹部,在下腹部正中央切口,长约2 cm,打开腹腔寻找盲肠,小心分离其远端与大肠的系膜,寻找盲肠与小肠及大肠交界处,用灭菌4号丝线环形结扎。在与肠系膜相对的盲端肠壁浆膜面用9号针头穿刺2次,2个针孔相距约3 mm,第1针孔距盲端约3 mm,同时在第2针孔处放置1条宽2 mm的橡胶引流片,防止伤口愈合,轻轻将肠管放回原处,关闭腹腔,逐层缝合。术后即刻皮下注射生理盐水,补充手术过程中体液的丢失,剂量10 mL/kg。 　　2010年第27卷广州中医药大学学报张丹，等.安宫牛黄丸对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1基因表达及髓过氧化物酶活性的影响第1期1动物分组与给药75只大鼠随机分为正常对照组，脓毒症模型(CLP)组,AG490组，RPM组，安宫牛黄丸低、中、高剂量组。AG490组于术前0皮下注射8 mg/kg 的Janusk激酶2(JAK2)抑制剂——AG490,RMP组于术前0皮下注射0的信号转导和转录激活子(STAT)抑制剂——雷帕霉素,安宫牛黄丸低、中、高剂量组分别于术前0和术后6 h按1、2、3剂量灌胃安宫牛黄丸,正常对照组、CLP组、AG490组和RPM组动物灌胃等容积蒸馏水。 　　1标本采集和处理于造模后24 h活杀动物,无菌条件下取肺组织50 mg置于液氮中保存。无菌状态下,另取肺组织200 mg,加入1 mL生理盐水在冰浴下匀浆,3 000 r/min离心15 mi