乙肝基因检测及其临床意义.docVIP

乙型病毒性肝炎的基因检测及其临床意义 提要：目的：通过对乙肝基因检测的阐述及其与其他方法学的对比，凸显其在乙肝治疗的重要性。 方法：乙肝病毒基因定量检测及免疫胶体金法检测。结果：基因检测灵敏度高，可判断病毒是否处于复制期，且其结果数值可直接反应病毒复制状况。结论：乙肝基因检测对乙肝患者的治疗有极其关键的指导作用。 关键字:HBV PCR HBV-DNA HBV感染人体后，可从血中测得抗原和抗体类物质，称为血清标志物；同时，也可测出病毒的基因组核酸或其它相关核酸，如HBV-DNA和HBV-DNAp，称为分子标志物；这些标志物的存在和变化，反映病毒在宿主中的状态和病情的发展情况，是病毒性肝炎的重要实验室诊断依据。 HBV是乙型肝炎、肝硬化和肝细胞癌的主要致病因素。全球约20亿人为HBV易感人群，3.5亿为慢性HBV感染者，乙肝病毒有8个基因型，其中中国有4个基因型。 1.关于乙肝病毒的介绍 1.1乙肝病毒的特点 1.1.1 HBV的基因变异性 HBV是极度变异的病毒之一，变异是病毒的特性，往往给临床诊断带来一定的困难。 1.1.2 HBV的嗜肝性 HBV的一旦进入人体只侵袭肝脏。 1.1.3 HBV的感染的慢性化 由于乙肝不能彻底的根治，长期下来多转为慢性乙肝这个过程可达几十年，所以它是一个重要的传染源。 1.1.4 HBV的致癌性 目前可以肯定HBV是诱发肝癌的重要病因，有80-90%的肝癌患者有乙肝病史。 1.1.5 HBV具有顽强的抵抗力 能耐受低温、紫外线、干燥和一般消毒剂。100C°10分钟高压蒸汽灭菌，0.5的过氧乙酸等能使HBV灭活。 1.1.6 HBV具有严格的种属特点 HBV仅在人或黑猩猩身上生存。 1.2 乙肝病毒的基因组成 HBV基因组为双链不完全环状DNA，由 3200个核苷酸组成，其负链包括四个开放读框架区：1、S基因区，由S基因、前S2基因(Pre-S2)和前S1基因（Pre-S1）组成，分别编码HBsAg、前S2和前S1蛋白或抗原（Pre-S2Ag和Pre-S1Ag）。 2、C基因区，由前C基因和C基因组成，分别编码HBeAg和HBcAg。 3、P基因区，编码乙型肝炎病毒相关DNA聚合酶 HBV-DNA是病毒的核心成分，是病毒复制及有传染性的标志，是病毒感染的最直接、特异和灵敏指标。急性乙肝时， HBV-DNA 阳性超过 8 周可变慢性。在慢性感染时 HBV-DNA 可到肝细胞 DNA 中，称为整合型 HBV-DNA ，如 HBV 病毒基因已整合至宿主基因，治疗药物则难以到达，这是 HBV 不易从体内清除的重要原因之一。PCR 法检测，既可以定性，又可以定量，其临床应用有： 临夏州人民医院检验科穆廷杰? 病情评估肝炎病毒在肝细胞内大量复制是导致肝细胞免疫损伤的启动因素。血清 HBV-DNA含量高低与肝脏病理损害程度相关， HBV-DNA水平越高，肝组织炎症反应越重。据此，通过定量检测 HBV-DNA可以间接评估慢性肝炎患者肝脏损伤的情况。 ? 疗效观察用抗病毒药物治疗慢性病毒性肝炎，治疗前病毒基因水平愈高，疗效越差；水平愈低，清除病毒可能性越大。相应地，在治疗过程中，病毒基因水平下降愈快，完全治愈的机会越大。因此可将肝炎病毒基因检测作为预测和观察抗病毒疗效的一种手段。? 预后判断治疗或未经治疗的慢性病毒性肝炎，病毒基因水平保持稳定高浓度者预后不良；垂直传播途径感染肝炎病毒者，病毒基因含量高，对各种抗病毒治疗的反应低，预后差；病程中，尽管反映肝细胞损害的其它指标正常，但病毒基因水平经常波动者易发展为肝硬化。 药效验证：任何一种抗病毒药物。治疗后定量PCR可直接准确地测定体内病毒数量，有助于疗效的判断。 所以说HBVDNA定量检测指标在乙肝治疗中有着非常重要的意义，一般以定量检测1.0以下为阴性，以上为阳性。阳性提示体内病毒复制活跃，血液中含量高，传染性较强；阴性则相反，病毒复制已得到抑制，血液中含量底，传染性弱只有体内的HBVDNA定量指标降低，病毒的复制繁殖才会停止，乙肝的彻底治愈才有希望。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成模板DNA的变性模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备模板DNA与引物的退火（复性）模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合引物的延伸DNA模板--引物结合物作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多