11-微生物与免疫.ppt

本章内容 第一节 抗原 第二节 非特异性免疫 第三节 特异性免疫和抗体 第四节 多克隆抗体和单克隆抗体 第五节 血清学反应 第六节 现代免疫检测技术 免疫学（Immunology） 是研究抗原性物质、机体的免疫系统和免疫应答的规律和调节，以及免疫应答的各种产物和各种免疫现象的一门科学。 第一节 抗原 一、多克隆抗体（polyclonal antibody, PcAb） 将由多种抗原成分组成的抗原物质，采用传统方法免疫接种实验动物后采集免疫血液，分离所得到的抗血清即为多克隆抗体。含有多种抗原成分的抗原物质（如细菌抗原、病毒抗原），进入机体后可激活许多淋巴细胞克隆，使机体产生可针对各种抗原成分或抗原表位的抗体，由此获得的抗血清是一种多克隆的混合抗体，具有高度的异质性。 第五节、抗原抗体反应 3、放射免疫测定（radioimmunoassay，RIA） 放射免疫测定是一种以放射性同位素作为标记物，将同位素分析的灵敏性和抗原抗体反应的特异性这两大特点结合起来的测定技术。又分为放射免疫分析法和放射免疫测定自显影法。放射免疫技术灵敏度极高，能测得毫微克至微微克（10-9~10-12g）的含量，广泛用于激素、核酸、病毒抗原、肿瘤抗原等微量物质测定。但需特殊仪器及防护措施，并受同位素半衰期的限制。 4、免疫印迹（immunoblot或westernblot） 免疫印迹是在用于DNA分析的DNA印迹（southern blot）技术基础上发展起来的蛋白质检测技术。其原理是将SDS电泳的高分辨率与免疫反应的高度特异性相结合。待测样品经SDS电泳分离后，转移到固相介质如醋酸纤维膜上，然后用标记抗体揭示特异抗原的存在。本方法广泛用于蛋白质样品分析研究。 2. 酶联免疫吸附测定 （enzyme linked immunosorbent assay, ELISA） 将可溶性抗体或抗原吸附到聚苯乙烯等固相载体上进行免疫酶反应的定性定量方法。 　抗原与抗体的免疫反应和酶的高效催化反应有机结合，是目前应用最广泛的生物学技术。 酶与抗原或抗体结合后，不改变抗原或抗体的免疫学反应特异性，也不影响酶本身的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶，催化无色底物生成有色产物，分光光度计比色以对抗原或抗体定量或定性。 常用的酶： 辣根过氧化物酶（底物：邻苯二胺） 碱性磷酸酶（底物：对硝基酚磷酸盐） 直接法： 用酶包被的抗原或抗体直接检测包被在酶标板上的抗体或抗原， 被检抗原或抗体的量与产物颜色成正比。 间接法（检测抗体） ： 将酶标记在抗抗体上，当抗原与抗体结合后， 再用酶标抗抗体来检查抗体是否与抗原结合。 双抗体夹心法（检测抗原）： 先用一种未标记的抗体包被酶标板，然后每孔加入待测抗原，洗涤除去未结合抗原。然后加入对该抗原特异的第二抗体-酶结合物（形成了抗体-抗原-抗体三明治夹心层），再加入酶的底物，观察颜色反应。 直接法 间接法 （检测抗体） 双抗体夹心法 （检测抗原） 1. 生物制品 凡是人工免疫用的抗原和抗体制品以及诊断用的抗原和抗体制品统称为生物制品。 第五节、生物制品及其应用 * * 第十一章 微生物与免疫学 1）定义 能诱导机体产生抗体和细胞免疫应答，并能与相应抗体和致敏淋巴细胞发生特异结合反应的物质。 免疫原性（immunogenicity）或抗原性： 抗原在体内激活免疫系统，使其产生抗体和特异效应细胞的特性 免疫反应性（immunoreactivity）或反应原性（reactinogenicity）： 抗原能与相对应的免疫应答产物(抗体及致敏淋巴细胞)发生特异结合反应的能力。 2） 抗原的两个特性： 1. 抗原（Antigen，Ag） 3）抗原的类别 完全抗原（complete antigen）： 具有免疫原性和反应原性的抗原。 （大多数蛋白质、细菌、病毒等） 半抗原（hapten）或不完全抗原（incomplete antigen）： 只有反应原性而没有免疫原性的抗原。 （类脂质、寡糖、核酸及许多药物） 半抗原与较大的载体分子（甲基化牛血清蛋白）结合成复合物时，即可获得免疫原性（如青霉素）。 4）抗原免疫原性的物质基础： 异己性； 相对分子质量； 化学结构与组成； 抗原物质上能够刺激淋巴细胞产生应答并与其产物特异反应的化学基团。它是抗原特异性的物质基础。抗原所携抗原决定簇的数目称为抗原价，一般抗原是多价的。 抗原决定簇（antign determinant）或表位（epitope）： 每种细菌的细胞都是一个包含多种抗原成分的复合体 5）主要的微生物抗原 菌体抗原：是革兰氏阴性菌细胞壁抗原，其化学本质为脂多糖(LPS)的多糖侧链，与外膜连接。 过去称O抗原。