内毒素的测定.ppt

主要内容 内毒素的来源及结构 内毒素的生物学活性 内毒素检测的临床应用 内毒素的检测方法及参考范围 检测样本的采集及影响因素 内毒素的检测原理 革兰阴性菌脂多糖（内毒素）检测原理：革兰阴性菌脂多糖（内毒素）激活酶反应主剂中的相应因子后形成凝固蛋白， 根据其引起的浊度变化对革兰氏阴性菌脂多糖（内毒素）浓度进行定量测定。 检测样本的采集及影响因素 检测样本：血液 采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管。常规病人早上用药治疗前空腹采血/取样（血透患者透析前采血）。 样本保存：样本采集后应在3000转/分进行离心，若不能及时检测，应将血浆转移至无热原转移管内，在-30℃冰箱中冷冻保存，一周内使用。 特殊标本处理 ：对一般黄疸、溶血、乳糜血标本，稀释2~5倍后进行检测 ；对于严重的黄疸、溶血、乳糜血标本，应重新采血。 影响结果的因素 产生假阳性的原因有：操作环境及操作过程中污染，应用某些抗生素类如?-酰胺内酯类、喹喏酮类等患者。 MB-80微生物快速动态检测系统 侵袭性真菌感染（IFI）现状 IFI发生率不断增加； IFI感染病死率很高； IFI诊断困难及漏诊情况严重。 科玛嘉念珠菌显色培养基的菌落颜色： 热带念珠菌----灰蓝色 白色念珠菌 ----绿色 克柔念珠菌----粉红色 光滑念珠菌----紫红色 其他念珠菌----白色 科玛嘉念珠菌显色培养基的菌落颜色： A/E--白色假丝酵母菌，B/C-克柔假丝酵母菌，F--光滑假丝酵母菌，D-热带假丝酵母菌 标本采集及保存 国内侵袭性真菌感染不容忽视 临床药物治疗杂志 2007年第5卷第1期 感染率(%) 中国感染与化疗杂志2008 年7 月20 日第 8 卷第4 期 尸检研究发现，75%的侵袭性真菌感染病例在生前漏诊 诊断困难的主要原因： --- 临床表现不典型，易被基础疾病所掩盖 --- 确诊常需侵入性手段获得组织标本，侵入性操作常因患者 的病情所限难以实施 --- 真菌检测项目开展相对不足或滞后 IFI诊断困难及漏诊情况严重 主要可引发侵袭性真菌感染的疾病 肺炎 肺纤维症 脑出血 脑梗塞 硬膜下血瘤术后 胸部大动脉瘤术后 糖尿病 再生障碍性贫血 MODS DIC 胃癌，肝癌，肝内胆管癌，肺癌，多发性骨髓瘤，白血病，恶性淋巴瘤 肺结核 腹腔内脓肿 AIDS 呼吸系统 疾病 感染及 寄生虫病 循环系统 疾病 内分泌 疾病 血液及造血 器官疾病 肿瘤类 侵袭性真菌感染( invasive fungal infection, IFI)的发病率逐年上升,其中又以侵袭性肺部真菌感染( invasive pulmonary fungal infection, IPF I) 最常见,大约占50%～60%。未经及时治疗的肺部真菌感染患者的病死率可高达30% ～80% 。 　侵袭性肺部真菌感染 临床表现：缺乏特异性,多表现为发热、咳嗽、咳痰、咯血、胸闷、呼吸困难等。 现 状：两高两低一快 检测方法相对滞后,早期诊断和治疗仍存在困难,副作用小的 新型抗真菌药物价格昂贵,导致病死率高。 高院内感染率和病死率 低临床和实验室诊断率 患者病情恶化快 　侵袭性肺部真菌感染 死亡率(%) 诊断延迟 时间 (h) ICU诊断延迟时间与死亡率的关系 11 33 30 35 10 15 20 25 30 35 12 h 12-24 h 24-48 h 48 h Morrell M et al. Antimicrob Agents Chemother 2005, 49:3640–3645. 美国四大医疗中心做的一项回顾性研究 死亡率(%) 诊断延迟时间(d) Garey KW et al. Clin Infect Dis 2006, 43:25–31 . b1,6 葡聚糖 磷脂双分子层 几丁质 麦角固醇 b1,3葡聚糖 合成酶 mannoproteins β1,3 真菌细胞膜、壁结构 羊毛固醇C－14去甲基化酶 14位还原和7－8位异构酶 角鲨烯环氧化酶 1-3-β-D-葡聚糖本质及特点 真菌细胞壁成分，占50%以上 1 其他微生物、动物及人的细胞不含该成分 2 用于侵袭性真菌感染的早期诊断 3 (1-3)-β-D-葡聚糖特性 1. 2. 3. 对热极为稳定，高压 121℃并不能使其灭活。 在念珠菌和曲霉菌细胞 壁中含量较多，对G 试验灵敏。 当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理后，(1-3)-β-D-葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液中含量增高。当真菌在体内含量减少时，机