南医微生物实验课件二.ppt

实验内容 1、录像：免疫标记技术 2、介绍：血清学反应 3、示教：单扩、双扩、火箭电泳、 对流免疫电泳、淋转、E花环 4、操作：玻片凝集 抗原的分类与抗原抗体反应的分类 颗粒性抗原 凝集反应 可溶性抗原 沉淀反应 （一）凝集反应 颗粒性抗原 可溶性抗原＋载体（与免疫无关） 直接凝集反应：玻片法：定性，测抗原 试管法（肥达试验）：半定量，测抗体 间接凝集反应 间接凝集抑制试验 （三）补体结合试验 方法： 待检系统：Ag（未知）+Ab（已知）+补体 指示系统：绵羊红细胞（Ag）＋溶血素（Ab） 结果：溶血——阴性 不溶血——阳性 直接凝集反应——玻片凝集 材料：玻片1张/1人，1号、2号菌落，生理盐水，诊断血清，接种环 方法：取生理盐水3～4环，菌落1～2环，后加血清2环 轻摇玻片，1～2分钟后观察 结果判定：出现乳白色凝集块属阳性反应 *玻片扔在后面的玻片缸里 * * 微生物与免疫学试验（二） 血清学反应 ★抗原与相应抗体相遇可发生特异性结合，在外界条件影响下呈现肉眼可见的反应。实验所用抗体通常存在于血清中，故名。 特异性 可逆性 结合物的可见性与带现象 前带现象：抗体过剩 后带现象：抗原过剩 比例适当：较大的晶格状 免疫复合物 ★特点（抗原抗体反应的特点） 抗原抗体反应的影响因素 浓度与比例 电解质 温度 酸碱度 ★血清学反应的种类 1）凝集反应（agglutination） 2）沉淀反应（precipitation） 3）补体结合试验（complement fixation test, CFT） 4）中和反应（neutralization） 5）免疫标记技术 （二）沉淀反应 概念：可溶性抗原 + 抗体 沉淀物 单向琼脂扩散、火箭电泳：抗原定量试验 抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向） 双向琼脂扩散、对流免疫电泳：抗原分析、 抗原定性试验等 抗原、抗体同时扩散（自由、定向） 单向琼脂扩散 单向琼脂扩散试验是一种定量试验。 将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在适当位置打孔，将抗原加入孔中扩散，与板中抗体相遇，在比例合适处呈现白色沉淀环，环的直径与抗原含量成正比。 主要用于测定血清各种Ig和补体成分的含量 单向定量免疫电泳（火箭电泳） 将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在板的一端打一排小孔，加入待检样品，置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰，状如火箭，称火箭电泳。沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。 敏感度与单扩相仿，但需时较短。 双向琼脂扩散 在琼脂板上打孔，抗原和抗体分别加到相应孔中，二者自由向四周扩散，在比例合适处形成沉淀线。若同时含有若干对抗原抗体系统，可出现多条沉淀线。 可用于分析和鉴定标本中多种抗原成分 对流免疫电泳 打孔：金属打孔器打两排孔，抗原孔与抗体孔间距离为4毫米至5毫米。 加样：抗血清加于抗体孔内；待测抗原、阳性、阴性对照抗原分别加于抗原孔内 电泳：将琼脂板置电泳槽，抗原孔置阴极端，抗体孔置阳极端。板两端分别用湿纱布与缓冲液相连，通电30分钟。 结果：在相应抗原、抗体孔间出现沉淀线。 （四）中和反应（neutralization） 病毒中和试验 毒素中和试验 （五）免疫标记技术 将已知抗体或抗原标记显示性物质，通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。 常用的标记物有：酶、荧光素、放射性同位素、胶体金等 淋巴细胞转化试验 转化百分率正常值为70%左右 分裂相：即染色体型 母细胞：大4-5倍；核质疏松，有1-3个核仁；核周透明区；胞浆有空泡 过渡型：略大；核质略疏松；着色较淡 小淋巴细胞：核质致密；着色深；胞浆少 E玫瑰花环试验 T细胞表面有绵羊红细胞受体，可在自然情况下与绵羊红细胞结合，形成E玫瑰花环，由此可区分T淋巴细胞与B淋巴细胞。 生理盐水＋ 1号菌落 生理盐水+ 1号菌落＋诊断血清