复方丹参高效液相色谱法.docVIP

高效液相色谱-蒸发光散射检测法同时缓释片中丹参酮ⅡA和人参皂苷Rb1含量 摘要：目的 建立同时测定复方丹参缓释片中丹参酮II 和人参皂苷Rb1含量的方法。方法 采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法。色谱 柱为AgilentC18(250mm×4.6mm，5um)，乙腈为流动相A，0.02％磷酸溶液为流动相B．梯度洗脱(0～5min，20％ ～25％流动相A；5～30min，25％-45％流动相A)，流速：1．0mL.min-1，蒸发光散射检测器，氮气流量1．6L.min-1，漂移管温度70℃。结果 丹参酮ⅡA和人参皂苷Rb1分别在7.295-116.7ug.mL-1 和4.063～65.00 ug.mL-1的范围内呈良好线性关系，平均回收率分别为96．70％和98．92％，RSD分别为1.46％和0．93％。结论 该方法操作简单、快速、准确，重复性好，可用于复方丹参缓释片的质量控制。 关键词：HPLC-ELSD法；复方丹参缓释片；丹参酮II A；人参皂苷Rb1；含量 复方丹参缓释片是以丹参、三七提取物、冰片包合物和缓释辅料制成。复方丹参类制剂具有活血化瘀、理气止痛之功效，用于气滞血瘀所致的胸痹，症见胸闷、心前区刺痛；冠心病心绞痛见上述证候者[1]。国内文献主要是针对复方丹参片、复方丹参滴丸、复方参颗粒测定丹参主要成分丹参酮ⅡA、丹酚酸B和丹参素钠含量[1-4]，或者是测定三七主要成分人参皂苷Rb1和人参皂苷Rb等的含量[5-8]，而同时测定丹参和三七主要成分含量的方法未见报道。丹参、三七是复方丹参缓释片的主要成分，有效成分主要有丹参酮ⅡA、丹酚酸B以及人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1等l【1】，其中，丹参酮ⅡA和人参皂苷Rb1的含量变化会使药品质量和疗效存在较大的差异。为了更有效控制药品质量，笔者利用高效液相色谱一蒸发光散射检测法，同时对复方丹参缓释片中丹参酮ⅡA和人参皂苷Rb1进行了含量测定，取得了预期结果，为复方丹参缓释片的质量控制提供了依据。 1 仪器与试药 1．1 仪器Agilentl100高效液相色谱仪(美国惠普公司)；Alltech 2000ES型蒸发光散射检测器(美国奥泰科技有限公司)；Agilent C18柱(250mm×4.6mm，5um)；Sartorius CP225D电子分析天平(德国赛多利斯公司)；DL360A超声波清洗器(上海金鹏分析仪器有限公司，功率500W，频率40KHz)。 1．2 试药丹参酮Ⅱ对照品(中国药品生物制品检定所。批号110763—200515)、人参皂苷Rb1对照品(中国药品生物制品检定所，批号110702—200920)。乙腈为色谱纯。水为双蒸水，其他试剂均为分析纯；复方丹参缓释片(自制，批20100502。 2 方法与结果 ， 2．1 色谱条件选用Agilent C18色谱柱(250mm×4．6mm，5um)，以乙腈为流动相A，以0.02％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱(0～5min，2O％ ～25％ 流动相A；5～30min。25％ ～45％流动相A)；流速：1．0mL.min-1；柱温：室温；蒸发光散射检测器，氮气流量1．6L.min-1，漂移管温度70℃ ；进样量20uL。在上述色谱条件下，丹参酮ⅡA和人参皂苷Rbl与其它组分能得到有效分离，其保留时间相差15min以上。分离度大于1.5，阴性无干扰(见图1)。 1．人参皂苷Rb1；2．丹参量ⅡA 2．2 溶液的制备 2．2．1 混合对照品溶液的制备：精密称取丹参酮Ⅱ和人参皂苷Rb1 对照品29．18、16．25mg。分别置于10mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，得各自贮备液。再分别用移液管精密吸取各贮备液2mL，置于同一20mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 圈1 复方丹参缓释片 2.2.2 供试品溶液的制备： 对照品色谱图；B．复方丹参缓释片色谱图；C．阴性对照 取本品20片，精密称定，研碎，取适量(约相当于1片量)；)，精密称定，置具塞棕色锥酮ⅡA 形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声提取约50min，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失质量，摇匀，用微孔滤膜(0.45um)滤过，取续滤液。置棕色量瓶中，即得。 2．3 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液0．25，0．5，1．0，2．0和4．0mL，分别置于5个10mL棕色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取10 uL，按2．1项下色谱条件进样测定，以质量浓度(x)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归，得丹参酮ⅡA的线性回归方程为Y=1.258X+4.126(r=0.9999)；人参皂苷Rb1的回归方程为Y=1．425X+5．283(r=0．9990)。结果表明