番茄红素标准品的制备.pdf.doc

番茄红素标准品的制备 摘 要 采用番茄酱作原料, 经 0.5 mol/L NaOH溶液40℃皂化,体积分数95%乙醇洗涤,乙酸乙酯40℃提取,得到番茄红素提取液。提取液经40℃ 减压浓缩, 0℃结晶和重结晶,每千克番茄酱可得到纯度99%的番茄红素标准品100mg左右。该标准品制备方法操作简单,有助于番茄红素高效液相色谱测定法的普及和推广。 关键词 番茄红素,标准品,制备  番茄红素( lycopene) 是一种脂溶性天然色素, 是类胡萝卜素的一种, 广泛存在于番茄、胡萝卜、西瓜、 南瓜、木瓜等植物果实中。其中以番茄果实含量最 高, 为 30~ 140 mg/ kg 。番茄红素不仅是无毒无副作 用天然食用色素, 而且还具有抗氧化、防癌症和抑制 突变等多种功能[ 1, 2] 。已被世界粮农组织( FAO) 、世 界卫生组织( WH O) 和联合国食品添加剂委员会 ( JECFA) 正式认定为营养与着色 双重作用的功能性 食品添加剂。 番茄红素的测定主要采用以苏丹Ⅰ为标准品的 分光光度法[ 3] 。该方法优点是所用标准品价廉易得, 但缺点是系统误差较大, 不能排除 胡萝卜素等类胡 萝卜素的干扰。高效液相色谱法能将番茄红素从繁 杂的类胡萝卜素组分中有效分离, 因而干扰因素少, 番茄红素测定结果准确[ 4~ 6] 。但是高纯度番茄红素 标准品价格昂贵, 不易保存, 高效液相色谱法因此难 以普及。本文选用番茄酱作原料, 经过预处理、醇洗、溶剂萃取、结晶和重结晶过程, 制备了纯度 99% 的 番茄红素标准品。 材料与方法 .1 材料与仪器 .1 1 材 料 番茄酱, 产自新疆; 乙酸乙酯, ; 体积分数 95%乙醇, NaOH ,;苏丹 I 号, 分析纯; 番茄红素对照品 1 .1 2 仪 器 低速离心机 LD4 2A , 722S 分光光度计 , 水浴恒温振荡器 , 数显电热保温箱 , Motic B series 显微镜。 1. 2 实验方法 .2 1 番茄红素的直接测定法[ 3] .2 .1 1 制作标准曲线 准确称取标准苏丹 I 号色素 25 0 m g 溶于无水 乙醇, 定容至 50 mL, 移取 0. 26、0. 52、0 .78、1 .04、 .30 mL 该溶液, 分别置于 50 mL 容量瓶中, 用无水 乙醇稀释至刻度。混合后即相当于 0. 5、1.0、1 .5、 2. 0、2. 5 g / mL 番茄红素的苏丹 I 号色素标准溶液, 然后, 用 722 型分光光度计在番茄红素最大吸收波长 处( 465 nm 左右) 分别测定其消光值, 测定光压 10V, 光径 1 cm。以番茄红素每毫升微克数为横坐标, 以消光值为纵坐标, 绘制番茄红素标 准曲线。 .2 .1 2 样品中番茄红素的测定 样品用 722 型分光光度计在与制作标准曲相同的条件下, 测其消光值, 以蒸馏水作空白对照。经 查标准曲线可知番茄红素含量, 通过稀释倍数的折算 可知样品中番茄红素的含量。 1 .2 2 番茄红素的高效液相色谱分析法 色谱条件: 色谱柱, 大连依利特 ODS2 反相柱 ( 46 mm ×250 mm, 5μm);流动相,乙腈:CHCl3 体 积比为92:8; 检测波长472 nm, 柱温:25℃,流速1 mL/min,进样量20μL。 1.2 3 番茄红素标准品的制备方法 ( 46 mm ×250 mm, 5μm);流动相,乙腈:CHCl3 体 积比为92:8; 检测波长472 nm, 柱温:25℃,流速1 mL/min,进样量20μL。 1.2 3 番茄红素标准品的制备方法 番茄酱 ① 皂化 ② 乙醇处理 ③ 乙酸乙酯提 ④ 减压浓缩 ⑤ 结晶 ⑥ 重结晶 皂化: 称取100 g 番茄酱, 加100 mL 0. 5  Mol / L NaOH 溶液 40℃ 皂化 1 h。 番茄酱经 1 2 3 的②~ ⑤, 得到番茄红素样品 ② 乙醇处理: 用 600 mL 的体积分数 95% 乙醇 A。肉眼观察样品 A 金属光泽不明显, 显微镜下观察 分 3 次洗涤皂化后的番茄酱, 去除部分杂质并脱水得 样品 A 色泽、结晶形状都不均一( 图 1 A) , 经测定样 到脱水番茄酱。 品 A 纯度为 72 8% 。 ③ 乙酸乙酯提取: 向脱水番茄酱中加入 150 m L 番茄酱经 1 2 3 的①~ ⑤, 得到番茄红素样品 乙酸乙酯 40 提取 2 h, 过滤, 滤渣中加入150 m L 乙 B。肉眼观察样品 B 有明显的金属光泽, 显微镜下观 酸乙酯 40 再提取