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微生物综合性实验设计方案.doc
设计性试验
——设计方案
题 目:饮料、水中细菌总数的测定及产酸菌的鉴定
指导老师: 高慧娟
院 别: 农业与生物技术学院
专 业: 生物科学
组 别: 第三组
完成日期:2011年12月21日星期三
饮料、水中细菌总数的测定及产酸菌的鉴定
——实验设计
研究背景及意义
水是生命之源,人类无法离开她而生存,然而当前水质污染令人堪忧,饮用水安全无法保证。水又是微生物广泛分布的天然环境,无论是地表水还是地下水,甚至雨水或雪水,都含有多种微生物。根据细菌对氧的需求情况,可分为三大类:厌氧菌、兼性厌氧菌、好氧菌。当水体受到人、畜粪便、生活污水或某些工业废水污染时,水中厌氧菌和兼性厌氧菌等微生物的数量可大增。水环境研究显示我国70%以上的河流受到了污染,全国湖泊约有75%的水域受到显著污染,90%以上城市水域污染严重。因此,水中的细菌总数测定,特别是肠道细菌的检验,在环境质量评价、环境卫生监督等方面具有重要意义。但是直接检查水中各种病源微生物,方法较为复杂,有的难度大,而且检查结果为阴性,也不能保证绝对安全。所以,在实际工作中经常以检查水的细菌总数,特别是检查作为粪便污染的指示菌,来间接判断水体污染状况和环境卫生学质量。
常用的指示菌或其它指示微生物有:总大肠杆菌群、粪大肠杆菌、粪链球菌、产气荚膜梭菌、双歧杆菌属、肠道病毒、大肠杆菌噬菌体、沙门氏菌属、志贺氏菌属、铜绿假单胞菌、葡萄球菌属、副溶血弧菌等。此外,还有水生的真菌、放线菌和线虫。
水中细菌总数可说明被有机物污染的程度,细菌数越多,有机物含量越大。所谓细菌总数是指1ml或1g检样在牛肉膏蛋白胨培养基中,37℃经24h培养后,所生长的菌落数。本实验所用的方法是稀释平板计数法,由于计算的是平板上形成的菌数,它反映的是检样中活菌的数量。
所谓大肠菌群,是指在37℃、24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌的总称,主要由肠杆菌科中四个属内德细菌组成。水的大肠菌群数是指100ml水样内含有的大肠菌群实际数值,以大肠菌群最近似数表示。
1.实验内容
1.1饮料、水中细菌总数的测定
1.水样的采取(饮料、自来水、湿地水、人工湖水)
2. 水中细菌总数的测定
3.计菌落数
1.2产酸菌的鉴定
1.无菌操作倒平板、划线分离,恒温培养
2.菌落观察
2.实验器材
2.1培养基
2.1.1 牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏1.5g,NaCl2.5g,琼脂10g,自来水500ml,Ph7.2-7.4;
2.1.2 伊红美蓝培养基: 蛋白胨2.5g,乳糖2.5g,磷酸氢二钾0.5g,伊红0.1g,美蓝0.012g,琼脂5g,蒸馏水 ml,Ph7.2。
2.2试剂:无菌水
2.3仪器:高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、光学显微镜、培养箱、培养皿(90mm或—10分钟,最后用无菌容器接取水样。
湿地水、人工湖水:将无菌的带玻璃塞瓶瓶口向下浸入距水面10—15cm的深层水中,然后翻转过来,除去玻璃塞,水流入瓶中,当取完水样后,塞好瓶塞,再从水中取出。
3.1.2水中细菌总数的测定
取三个无菌试管并标号,分别加入4.5ml无菌水,取0.5ml湿地水样注入1号试管摇匀,再从1号试管中取0.5ml注入2号试管内,如此稀释至3号试管内,稀释成浓度梯度为10-1、10-2、10-3;
分别取0.2ml的样液(饮料、自来水、湿地水、人工湖水、无菌水)加入牛肉膏蛋白胨培养基中,每种样液涂布2个平板。
3.1.2计菌落数
将涂布好的平板置于37℃恒温箱中培养24h,计平板上的菌落数。
3.2产酸菌的鉴定
取0.2ml的湿地水涂布在伊红美蓝培养基,置于37℃恒温箱中培养24h,计平板上的菌落数。
4 实验方法与步骤
4.1 实验流程
水样的采取→水样稀释→ 倒平板→ 涂布→ 培养→ 菌落计数、鉴定产酸菌
4.2 制作中的几个关键因素
—300之间的区域。
(3)为保证实验测定结果的精确性,可设置多个浓度梯度。
5.预期目的
(1) 熟悉水样的采集及细菌总数的测定方法;
(2) 掌握平板菌落的计数原则及产酸菌的鉴定。
6.结果预测
涂布有无菌水的培养基中不含有菌落;涂布有样液的培养基中菌落数量的关系:自来水处理后的饮料水人工湖湿地水;湿地水涂布在伊红美蓝培养基上可能会有紫色金属光泽出现。
7.结果记录
将测定结果记录在表中
10-1 10-2 10-3 无菌水 自来水 人工湖水 湿地水 饮料 平均值 菌落总数 【参考文
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