高效毛细管电泳--安培检测对核苷酸水解反应地研究.pdfVIP

电分析化掌进展·1999 F6 高效毛细管电泳一安培检测对核苷酸 水解反应的研究 宋立楠张太森方禹之’ 【华东师范大学化学系 上梅200062) 核酸是重要的生命物质，近些年来，对能够迅速催化水解核酸的人工酸的研究，已成为人 们关注的焦点，这对于进一步探索核酸的结构，其在生命活动中的作用，阐明细胞间信息传递 的机理等具有重要的意义，在分子生物学、临床医学、药理学等各领域都存在着广泛的应用价 值“]。本文利用高教毛细管电泳一安培检测的操作简便，运行成本低，样品需求量小，灵敏度高 等特点，对稀土金属离子对一磷酸腺苷(AMP)的水解作用进行了研究，取得了满意的结果，也 为人工合成具有水解核酸作用的金属酶，提供了一种有效的分析方法。 工作电位的选择实验选择+1．10v(vs．Ag／AgCI)为最佳工作电位．工作电位较低，灵 敏度不高，但当工作电位高于+1．15V时，背景电流，基线噪音也明显增大，信噪比降低。 电泳分离条件的选择 作为电泳介质，因为在碱性条件下AMP带二个负电荷，电渗流无法克服与其方向相反的电泳 速度，因此采用阳离子表面活性剂cTAB对毛细管内壁进行了动态涂布o]，采用负高压可在 较短时间内实现腺苷与一磷酸腺苷的分离，并且当cTAB浓度大于0．2mm01．I．叫时，由于 CTAB易与被分析物质发生缔合，造成严重的拖尾现象。实验以一21kV为最佳分离电压，因 为分离电压低，分析时间长，但分离电压过高，会导致噪音增加，热效应增太，峰展宽。采用上述 优化条件对重现性进行考察，腺苷与一磷酸苷迁移时间的标准偏差(RsD)分别为o．94％、 O．78％，峰高的RSD为1．0％、3．4％。 腺苷酸的水解作用水解反应在37℃下，pH值调节为8．2，恒温1h，通过对照实验表明． 稀土金属Ce(I)能够催化一磷酸腺苷的水解作用，见图1．在Ce(Ⅲ)作用下，一磷酸要腺苷部 分转化为腺苷，并且一磷酸腺苷减少的量与腺苷增加的量相当，表明ce(Ⅲ)是选择性的断裂 磷酸酯键起到催化水解的作用，并且Ce(Ⅱ)浓度增加，一磷酸腺苷水解程度增大．达到一定程 度后，水解作用趋于平稳，同时水解程度随时间增加而增大。 结论．本文将毛细管电泳技术用于核酸水解作用的研究，取得了满意的结果。为寻找快速 有效地水解断裂核酸的人工合成金属酶，以及催化条件的优化．水解作用机理的探讨，提供了 一种方便的分析方法，对于金属酶的生理作用的研究，也具有非常重要的意义。 ·通讯联系人 ·347· 电分析化学进展-1999 C ● b j● {l。 l UL ， I 7 ● lI b r{—中—f1广气卜≮|=：蠹一 ●■_‘_) 1 ofAMP hydrOlysis showi鸣th F19ureElectr叩h盯哩r-ms at37℃1hourC； 3m01．L叫)+Ce(I)(20册01．L A：AMP(4X10—5m01．L一1)B：AMP(4×10 1)pH8．2