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第十届全田有机分析学术研讨会 分光光度法测定果糖的影响因素研究 徐岩李克 贾爱芬 (河北理工学l完化工系．唐山063009) 关t词同苯二酚分光光度法果糖 麓要本文研究了问苯二酚吸光光度法测定果糖的实验条件及干扰因素，探讨了该法在葡萄 糖异构酶活性测定中应用的可能性。 葡萄糖异构酶可使葡萄糖发生异构化反应而转变为果糖，在果葡糖浆、果糖生产及食品 添加剂行业中广泛应用．葡萄糖异构酶活力是以葡萄糖为底物，用单位时间内葡萄糖的减少 量或果糖的生成量来表示。目前，测定果糖生成量常用咔唑法n’21，测定葡萄糖减少量时常用 了蛋白质及tIgso,等对测定过程的影响，探讨了间苯二酚光度法在葡萄糖异构酶活力测定中 应用的可能性。 1仪器与试剂 721型分光光度计。 白蛋自水溶液：O．2mg／mL；硫酸镁水溶液：0．001mol／L。 2实验方法 I：l 盐酸溶液，置沸水浴中加热9min，取出后自来水冷却，用lcm比色皿、以试剂空白为参比、 于471rim处测其吸光度A值。 3实验条件 3．1溶液酸度 间苯二酚与果糖的显色反应需在酸性条件下进行，本文选择加入1．OmL1：1盐酸控制溶 液酸度。 3j2显色剂用量 浓度较小时，随着显色剂阅苯二酚用量的增加，吸光度逐渐增大，浓度进一步增加，出 现一平台。本文选择4．OraL间苯二酚作为显色剂的最佳浓度。 3．3加热时间 实验观察了测定液加热时间的影响。沸水浴中加热9min．体系颜色最深，延长时间、 颜色变浅。测定时加热9啊in。 3．4放置时间 显色后室温放置30rain，溶液吸光度没有变化。 4工作曲线 D53 纂十届伞国有机分析学术研讨会 分别移取不同浓度的果糖溶液，采用文中实验方法测定相廊!的吸光度。结果发现，果糖 浓度在0～2099／’mL范围内，吸光度与果糖浓度量线性炎系，回归方程为： 13， 相关系数R=O．994。 A=O．123C(gg／ml。)+0．0 5干扰实验 葡萄糖异构酶为蛋白质，酶催化葡萄糖异构反应时需加入订gSO。作为激动剂。因此本文 的牛血清白蛋白或1．0×10’mol／L的MgSO．不干扰果糖的测定。 6合成试样分析 测定葡萄糖异构酶活力，一般通过测定一定时间内酶作用{=葡萄糖而产生的果糖浓度而 完成，即测定酶促反应混合液中的果糖浓度。本文进行了合成试样分析。结果见表l。由此 可见，在类似葡萄糖酶促异构化反应液中，间苯二酚光度法可以测定果糖含餐，因此该方法 可用于葡萄糖异构酶活力的测定。 表1 合成试样中果糖的测定结果 回收率(％) k．SD．(％) ’98 1．0 试样组成：10pg／mt．葡萄塘，I．O“g／mL牛衄清白夤白．i．L)×lI)‘帅|／I．ⅥgS(h。 参考文献 1 8274—87 中华人民共和国国家标准．GB 9 7 2 葛玉斌．上立平．孔维．周慧．李惟。沈家骢． 学使化节鸯L报 96 6 『 5 ：j 郭勇．酶工程．Jt京：中国轻工业出版杜，1996． 4 姜英勤，黄治清．_马克荣，陈晓冬． 化学世界， ～晶睨g； 等0吼 ∞ “卜懈 ofFructose The of