高效液相色谱柱和新填料的研究.pdfVIP

LC，046 高效液相色谱柱与新填料的研究 王立群 (沈阳药科大学分析测试中心沈阳 110015) 长期以来人们为了达到分析的目的，只是在改变色谱柱方面下了很多功夫，由标准型 柱(250mm×4．6mmi．d．)向微型化、小内径和“快速”型发展。微型柱又称“毛细管柱”， 内径一一般是零点几毫米。它又分为开管柱、半填充柱和密实填充柱，由于内径小，可以处 理很小体积的样品，降低流速和溶剂消耗，在不损失分离度情况下提高了灵敏度。“快速” 分析柱内径与传统的色谱柱(～4．6mm)相同，但柱长变短及使用小颗粒(～3um)填料。 Dong和Gant曾使用短柱把灵敏度提高了40倍，再现性更好，分析时问缩短，成本F降。 对经常分析大量样晶的医药工业、质量控制、科研领域，利用柱子的不同长度和内径来解 决问题，显得t分重要。除了常用的不锈钢柱以外，具有玻璃衬里的不锈铡柱和玻璃柱也 在使用。此外，在适当的流动相条件下，这些柱子可用于各种不同形式的色谱法，如凝胶 色谱法、离子色谱法、疏水作用色谱法、金属螯台物作用色谱法和亲和色谱法。Hoyvath 等人把这类随流动相改变而改变分离模式以获得所需要的选择性的柱子的方法称为“多用 型” (Polytyptic)色谱法，也称为混合式色谱法。然而仅仅靠改变柱子形状和改变流动相 很难满足现代分析的要求。于是各种新的分析任务推动了新色谱固定相的发展。近年来对 新色谱固定相的研究一直是色谱研究的核心内容。反相色谱是各类色谱中分离效果较好的 通用型色潜，它也是利用物质与其有强疏水的非极性配基(如十八烷基)相互作用力大小不 同进行分离的，流动相为有机溶剂(如甲酵、乙腈等)和水的混合溶液。但是这种固定相有 一一些缺点：(1)在碱性介质中(pH7~g)不稳定；(2)在孔隙中大分子扩敞刚难，降低了柱效； (∞硅胶表面上的剩余硅烷基有离子交换作用。为此采取了以下一些措施：(1)用各种聚合物 代替二氧化硅作基质：(2)阁二氧化钛或二氧化锆作基质：(3)使用非多孔基质即单分散无孔 基质：(4)使用流通粒子(now．throngh particle)即所谓灌注色谱法。近年来，研制的多种填 充材料，其中一些是某些应用对高度专一的，一些是通抖3的。载体除了常用的硅蛆外．还 包括氧化物、炭类、聚合树脂、羟基磷灰石小球和醇脂糖，填料尺寸和孔的大小范围很宽， 对亲和色谱法、免疫亲和色谱法、手性分离、大分子和生物活性大分r都有专门的填料， 并己研制了用于具有许多种功能团化合物的混合型和混合床的填料。随着生命科学的发 展，蛋白质将会逐渐地代替化学药物，因此，首先要合成廉价的色谱填料(包括通用型的 和高选择性的色谱填料)。只有在这方面取得丁突破性进展后才能使高效液捅色谱法在药 物分析中的应用越来越广泛。下面具体介绍一下近几年的新固定相的研究。 1．硅胶表面键合或涂渍各种聚合物 近几年．用聚台物涂渍包覆硅胶作HPLC的填料日趋普遍，如聚烷基冬酰胺、烷基 聚硅氧烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯、聚乙烯亚胺、聚胺、聚T二烯马来酸及聚乙烯咪唑。 这种固定相比起ODs填料，既提高了选择性，又增加了化学稳定性。最近Ku唱anov提出 聚乙烯吡咯烷酮涂渍的硅胶在医药和药物分析中很有用，它的疏水性很强，适于分离蛋白 -J14． 质。有人用在硅胶E涂渍聚三氟苯乙烯填料的液相色谱法分离蛋白质得到好的效果。 2．在其它氧化物表面上涂渍各种聚合物 由于硅胶的稳定性不理想，近年来许多研究者用三氧化二铝和二氧化锆作基质．在其 表面涂渍各种聚合物作HPLc的填料，如用聚乙二烯涂渍兰氧化二铝作反相HPLC固定 相分离蛋白质、肤，用多孔二二氧化钛和二氧化锆键台十八烷基作高效液相色谱的填料。和 ODs填料进行比较，这种固定相适用于分离多环芳烃、烷基苯、低聚糖、单磺酰化氨基 酸、肽和蛋白质。也有把聚丁二烯涂渍在二氧化锆上作反相液相色谱填料的。 3．灌注色谱填料(pe币nsionchromatographypacking) 灌注色诺填料是1990年Afeyan等提出的，是为克服传统全多孔硅胶孔径小的缺点而 设诗的新型固定相，叫做“流通粒于”。对这种固定相的颗粒内部孔径形态进行了特殊设 计，使之有硼种尺寸的孔径，～种是大孔，Ⅱq“流通孔”，另一种是“小孔”，叫“扩