α突触核蛋白作用核苷酸序列的体外筛选研究.pdfVIP

中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2014Sep；30(9)：1225～9 ·1225 · 网络 出版时间：2014—8—711：40 网络 出版地址 ：http：／／www．cnki．nelfkcms／doi／10．3969／j．issn．1001—1978．2014．09．010．html 0【突触核蛋白作用核苷酸序列的体外筛选研究 马开利 ，宋连昆 ，苑玉和 ，张 莹 ，李 莉 ，杨金玲 ，朱 平 ，陈乃宏 (1．中国医学科学院 ·北京协和医学院药物研究所，天然药物活性物质与功能国家重点实验室，新药作用机制研究与药效评价 北京市重点实验室，药理学研究室，北京 100050；2．q-国医学科学院 ·北京协和医学院医学生物学研究所，云南 昆明 650118) doi：10．3969／j．issn．1001—1978．2014．09．010 共核蛋白病的致病机制。 文献标志码：A 文章编号：1001—1978(2014)09—1225—05 我们前期的研究表明，一syn可同时存在于胞 中国图书分类号：R341．31；R349．32；R394．2；R745．702．6 核和胞质中，进一步研究发现，仅一syn能够在核输入 摘要：目的 体外筛选 突触核蛋 白可能作用的核苷酸序 蛋白importirt 的介导下进入细胞核，通过影响细 列。方法 根据碱基组成特征合成一系列的核苷酸序列，与 胞周期而发挥毒性作用 。为了进一步弄清仅一syn 0【突触核蛋白一绿色荧光蛋 白(d—synuclein—greenfluorescent protein，13t—syn—GFP)融合蛋 白混合 ，采用 圆二色谱分析色谱 在胞核内的作用，本研究拟从核内的核苷酸序列角 峰的变化情况。结果 Ot突触核蛋白～绿色荧光蛋 白融合 度出发，应用圆二色谱 (circulardiehroism，CD)分析 蛋白混合入GC—box样核苷酸序列后导致色谱峰发生较大变 的方法，在体外筛选可能被o一【syn作用的核苷酸序 化。结论 d突触核蛋白转位进入细胞核后，可能通过作用 列，为阐明仅．syn核内的作用机制奠定基础。 脚啪㈣O一OO㈣0O一O 于GCbox样核苷酸序列 ，参与细胞核内的基因表达调控，从 1 材料与方法 而发挥其生理或病理作用。 1．1 核苷酸序列合成 核苷酸序列 (Tab1)由In． vitrogen公司合成，并溶解于CD缓冲液 (40mmol· 关键词：突触核蛋白；核苷酸序列；圆二色谱 ；GC．box样序 L一 citratepH 5．6，100mmol·L～ NaC1，1mmol· 列；核定位 ；帕金森病 L～EDTA)，终浓度为 100Ixmol·L～。 o【突触核蛋 白(Ot-synuclein，仅．syn)最早发现其 Tab1 Oligonucleotidesequence 定位于突触前末端及细胞核 j，随后的大量研究表 明，o一【syn的核定位存在于包括培养的细胞_2-31、o一【 gene Oligonucleotidesequence5 一 3 syn转基 因果蝇_4及小鼠_5在 内的各种实验系统 内。近来的研究表明，一syn的核定位可能在帕金 CCCCCCCCCCCCCCCCCCC