产黄青霉简单高效遗传转化法——电激转化法.pdfVIP

中国抗生素杂志2014年9月第39卷第9期 651 文章编号：1001—8689(2014)09—0651—03 产黄青霉简单高效遗传转化法—— 电激转化法 李树强 仪修南 贾亚娟 张春晓 (河北科技大学生物科学与工程学院，石家庄050018) 摘要：目的 研究产黄青霉 chrysogenum)电激转化方法，建立产黄青霉快速、高效的遗传转化方法。方法 应用美国 Bio-Rad电转仪，将外源DNA转化入产黄青霉菌丝中，研究了菌丝培养时间、电场强度、DNA类型等对遗传转化的影响。结果 菌丝培养24h，处于旺盛生长阶段，电场强度为6000V／cm，电阻2o0Q，电容20pF，环状质粒DNA较线状能获得转化效率稍高， 1P-gDNA获得的克隆数可达500个。结论 应用 电激转化方法对产黄青霉进行遗传转化属首次报道，特别是可直接将 目的片段 与T-DNA相融合，转化入产黄青霉中，该方法操作简单，快速高效。 关键词：产黄青霉；电激转化；菌丝；T-DNA 中图分类号：R378．1 文献标志码：A A simpleandhigh-efficientelectr0p0rati0nmethodforPenicillium ch~sogenum LiShu—qiang，YiXiu—nan，JiaYa-juanandZhangChun—xiao (DepartmentofBioscienceandBioengineering，HebeiUniversityofScienceTechnology,ShOiazhuang050018) Abstract 0bjective Tostudyasimpleandhigh—efficientelectroDorationmethodfor chrysogenum． M ethods TheexogenousDNAwaselectroporatedintothemycelium of chrysogenum withBio—RadGenePulser． Theculturaltimeofr chrysogenummycelium．electricfieldintensityandDNA typeweresutdied．Results The highertransformatione衔ciency(500clones／ugDNA)wasobtainedbyelectroporatedplasmidDNAintomycelium cultivatedofr24h attheconditionof20txF，200Q 6000V ／cm．Conclusion TheelectrOpOratiOnmethodofrP chrysogenum wasreportedfirstly．TheinterestedgenefusedwithT-DNA from AngrObacteriacabbeelectroporated into chrysogenum directly．ThemethodiSsimpleandhigh．e伍cient． Kevwords P chrysogenum；Electroporation；Mycelium；T-DNA 产黄青霉 chrysogenum)是青霉素生产菌，属 制备和再生较 困难 ，遗传转化效率较低 ，虽然采用 于丝状真菌。为详细 了解青霉素的生物合成及调控 农杆菌转化丝状真菌获得 了成功，但研究周期长， 的分子机制，研究基因功能，需要对一些基因进行 需要构建遗传转化的载体，并将载体转化入农杆菌 敲除或敲入 ，因此，高效的遗传转化体系是实现上 中。电激转化方法 由于其操作简单，效率高，己在 述研究的基础。 多种丝状真菌如粗糙链孢霉(Neurosporacrassa)t、 丝状真菌常用的遗传转化方法包