CGSIV病毒ORF22R序列分析，克隆及大肠杆菌表达.pdfVIP

第３５卷 第２期 暨南大学学报（自然科学与医学版） Ｖｏｌ．３５　Ｎｏ．２ ２０１４年４月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ＆ＭｅｄｉｃｉｎｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ａｐｒ．　２０１４ 　 ＣＧＳＩＶ病毒ＯＲＦ２２Ｒ序列分析，克隆及大肠杆菌表达 １ １ ２ １ 张　欣 ，　赵高翔 ，　李　蔚 ，　周天鸿 （１．暨南大学 生命科学技术学院，广东 广州５１０６３２； ２．中山大学 生命科学学院 国家生物防治重点实验室，广东 广州５１０２７５） ［摘　要］　中国大鲵虹彩病毒是近年来造成驯养大鲵大规模的发病及死亡的病原体之一．以病毒基因组为模板， 分离了ＯＲＦ２２ＲＤＮＡ序列．蛋白氨基酸序列信息分析结果表明中国大鲵虹彩病毒与蛙病毒属中类两栖类蛙病毒组 的成员有很高的同源性，达到９５９％～９８２％；而与蛙病毒属类ＧＩＶ病毒组成员的同源性相对较低，为３１７％；与 淋巴囊肿病毒属的成员的同源性最低，只有１６％左右．将ＰＣＲ技术分离的ＯＲＦ２２ＲＤＮＡ序列克隆至原核表达质粒 ｐＥＴ２２ｂ．重组质粒ｐＥＴ２２ｂＯＲＦ２２Ｒ转化于 Ｒｏｓｅｔｔａ大肠杆菌菌，经 ＩＰＴＧ诱导，表达重组蛋白．镍柱纯化后 ＳＤＳ ＰＡＧＥ检测ＯＲＦ２２Ｒ蛋白分子量为６５ｋＤ，ＣＧＳＩＶＯＲＦ２２Ｒ蛋白原核表达成功． ［关键词］　中国大鲵虹彩病毒；　ＯＲＦ２２Ｒ；　序列分析；　原核表达 ［中图分类号］　Ｑ７８６　　［文献标志码］　Ａ　　［文章编号］　１０００－９９６５（２０１４）０２－０１１８－０６ Ａｎａｌｙｓｉｓ，ｃｌｏｎｉｎｇ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣＧＳＩＶＯＲＦ２２ＲｉｎＥ．ｃｏｌｉ １ １ ２ １ ＺＨＡＮＧＸｉｎ，　ＺＨＡＯＧａｏｘｉａｎｇ，　ＬＩＷｅｉ，　ＺＨＯＵＴｉａｎｈｏｎｇ （１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＪｉｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６３２，Ｃｈｉｎａ； ２．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏｃｏｎｔｒｏｌ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｕｎＹａｔｓｅｎ（Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ）Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０２７５，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｒｅｃｅｎｔｌｙ，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｄｉｓｅａｓｅｓａｒｅｉｍｐｌｉｃａｔｅｄｉｎｔｈｅｄｅｃｌｉｎｅｓａｎｄｔｈｅｅｃｏｎｏｍｉｃｌｏｓｓｉｎｃｕｌ ｔｕｒｅｄａｎｄｗｉｌｄＣｈｉｎｅｓｅｇｉａｎｔｓａｌａｍａｎｄｅｒ．ＯｎｅｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｓｈａｓｂｅｅｎｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄａｓＣｈｉｎｅｓｅｇｉａｎｔｓａｌａ ｍａｎｄｅｒｉｒｉｄｏｖｉｒｕｓ（ＣＧＳＩＶ）．ＴｈｅｐｕｔａｔｉｖｅＯＲＦ２２ＲｏｆＣＧＳＩＶｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄ．ＴｈｅＯＲＦ ｃｏｎｓｉｓｔｓｏｆ１８１８ｂｐ，ｗｈｉｃｈｃｏｄｅｓｆｏｒａｐｒｏｔｅｉｎｏｆ６０５ａａｗｉｔｈａｐｒｅｄｉｃｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｓｓｏｆ６５１８５ｋＤ． ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｉｅｓｏｆｔｈｅｉｄｅｎｔｉｔｙｏｆｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＯＲＦ２２Ｒｗｅｒｅｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｒｉｄｏｖｉｒｕｓｓｐｅｃｉｅｓ．ＡｌｉｇｎｍｅｎｔｏｆｔｈｅｉｄｅｎｔｉｔｙｏｆｔｈｅａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｔｈｉｓＯＲＦｏｆＣＧＳＩＶａｎｄａｍｐｈｉｂ ｉａｎｌｉｋｅｒａｎａｖｉｒｕｓｅｓ（ＡＬＲＶ）ｓｈｏｗｅｄ９５９％－９８２