MBP融合肝素酶Ⅲ大肠杆菌高效表达体系构建.pdfVIP

第 65卷 第 7期 化 工 学 报 、b1．65NO．7 2014年a一7：研月．．．b一 CIESC Journal July 2014 一究一 一论一 一文一 MBP融合肝素酶III大肠杆菌高效表达体系构建 苏楠 ，吴敬君 ，李晔 ，张种 ，李梅 ，邢新会 (清华大学化学工程系，工业生物催化教育部重点实验室，生物化工研究所，北京 100084： 。北京电子科技职业技术学院生物技术系，北京 100029) 摘要：肝素酶Ill(heparinaseIll，HepC)是一种重要的多糖裂解酶，在抗癌药物开发、低分子量肝素生产 以及肝素 类药物的质量控制等方面具有重要的作用。目前制约其工业应用前景的主要技术瓶颈是生产成本高，异源重组表 达效果差，缺乏高效的表达方法。本研究借鉴前期经验，通过 HepC基因的密码子优化，并与麦芽糖结合蛋 白 (maItose—bindingprotein，MBP)融合，构建了MBP—coHepC (基因密码子优化后的蛋白为 coHepC)的大肠杆菌 表达体系，结合培养条件优化大幅度提高了HepC的可溶表达比例，其摇瓶发酵总酶活值达到7603．46IU ‘L～； 同时，本研究从转录和翻译水平揭示了HepC表达效果提高的可能原因。这些研究为肝素酶 III的应用发展提供了 基础 。 关键词：麦芽糖结合蛋白；肝素酶III；融合蛋白；序列优化；大肠杆菌 DOh 10．3969~．issn．0438—1157．2014．07．045 中图分类号：TQ028．8 文献标志码：A 文章编号：0438—1157(2014)O7—2829—14 ConstructionofMBPfusionheparinaseⅢ efficientexpressionsystem inE．coli SUNan，WUJingjun，LIYe，一，ZHANGChong，LIMei，XINGXinhui (iKeyLaboratoryforIndustrialBiocatalysis，MinistryofEducation，InstituteofBiochemicalEngineering，DepartmentofChemical Engineering，TsinghuaUniversity，Beijing100084，China；DepartmentofBiotechnology，BeijingElectronicScienceandTechnology VocationalCollege，Beijing100029，China) Abstract：HeparinaseIII(HepC)isanimportantpolysaceharidelyase，whichplaysavitalroleinthedevelopment ofanticancerdrugs，productionoflowmolecularweightheparin(LMWH)andqualitycontroloftheheparins．The mainbottlenecksofHepCapplicationarehighproductioncost，poorlevelofheterologousrecombinantexpression aswellaslackofefficientexpressionsystem．Basedonthepreviousexperience，thecodonoptimizationofHepC gene(theoptimizedgeneproductnamedascoHepC)andE．coliexpressionsystem byconstructingthe MBP—coHepC fusionproteinwerestudied．Combiningwith ufrtheroptimi