利用RNA沉默抑制子HC-Pro提高基因表达的策略.pdfVIP

誊 -您 馓徽 糍 燃 ． ． Onlinesystem：http：／w／wwjabiotechorg … gy 啊■—I_ 婴 利用RNA沉默抑制子HC．Pro提高基因表达的策略 金太成 张奇 赵卓 杨丽萍 1吉林师范大学生命科学学院，四平 136000；2南京农业大学生命科学学院，南京210095 通讯作者，yangliping781124@163．cm 摘 要 利用植物生物反应器生产药用蛋 白具有独特的发展优势，但外源基因在受体 内会发生基因沉默 现象而影响基因的表达。由于基因沉默抑制子能有效抑制外源基因的沉默反应，本研究利用沉默抑制子 蚜传辅助因子(helpercomponent．proteinase，HC—Pro)转基因烟草有效提高了外源基因的表达。采用叶片 注射法将携带表达载体p35S一30B．GFP的农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)重悬液分别侵染野生型烟草 (Nicoti0凡0bentamiana)和HC．Pro转基因烟草( bentamiana)，通过蛋白电泳检测和Westemblot检测技术 对绿色荧光蛋白(GFP)表达进行 比较 。研究结果表 明，与野生型烟草Nb相 比，HC—Pro转基因烟草中GFP 的表达水平显著增加 。本研究为基因沉默抑制子在植物生物反应器中的应用提供了理论依据。 关键词 瞬时表达，基因沉默抑制子，蚜传辅助因子(HC．Pro)，绿色荧光蛋白(GFP) StudyofIncreasingGeneExpressionbyRNASilencingSuppressorHC—Pro JINTai—Cheng ZHANGQi ZHAOZhuo YANGLi-Ping 1SchoolofLifeScience，JilinNormalUniversity,Siping136000，China；2CollegeofLifeSciences，NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing 210095，China Correspondingauthor,yangliping781124@163．com Abstract Usingplantsbioreactortoproducepharmaceuticalproteinshasspecialdevelopmentadvantages， however,foreign gene silencing usually affecte gene expression．Since gene silencing suppressor can effectively inhibitthegene silencing，wefocusedon using gene silencing suppressorhelpercomponent— proteinase(HC—Pro)toimprovegeneexpression．Theresultsshowedthatgreenfluorescentprotein(GFP) expressedinNicotianabenthamianaplantsby leafinfectionofAgrobacterium suspensioncontainingp35S一 30B-GFP vector．Comparedwith thewild type tobaccoNb，the expression levelofGFP significantly increased inHC—Pro transgenictoba