5味中药提取物对无乳链球菌的体外抗菌活性研究.docVIP

毕业论文（设计）题目 选题类型 基础型 课题来源 自选项目 学 院 动物医学院 专 业 药学（中兽药学方向） 指导教师 殷中琼 职 称 教授 姓 名 陈苹 年 级 2010 学 号 开题报告（立题依据、研究的主要内容及预期目标、研究方案、论文进度安排、主要参考文献） 立题依据 无乳链球菌是链球菌属的一个种，按Lancefied氏血清分类，划归B群，所以又可以称为B群链球菌。革兰阳性，单个、成双、链状排列长短不一在血，灰白色、表面光滑、有乳光、圆形菌落β溶血部分菌株β溶血环。  无乳链球菌是乳腺炎的病原体，常寄生于乳牛的皮肤、乳头及乳房内，通过挤乳机械或挤乳人员的手以及蝇类携带而传播。这种链球菌引起乳房炎后不产生明显免疫力，目前尚无可靠的多价菌苗人类可通过食入被污染的奶制品而被感染可见乳腺炎乳汁中的有害病菌既能引起乳房炎又能使人患病。年月中山大学附属东华医院报道了由无乳链球菌引起的四例新生儿败血症年月医学经济报报道了例无乳链球菌引起的新生儿败血症北京儿童医院新生儿病房在肺炎、败血症、脑膜炎等患例中确定无乳链球菌感染例 无乳链球菌主要引发乳腺炎，特别是牛乳腺炎，主要发病原因跟牛舍的管理和环境有关。圈舍的设计和管理直接影响到乳腺内感染的发生与否。挤乳操作的规范也是感染与否的原因之一。在防治方面主要以治为主，杀灭细菌，并防止病原菌的侵入，减轻乳房的炎性症状。治疗时，历来采用抗生素，也有用磺胺和呋喃类的。但是传统抗生素治疗存在许多不利因素，比如，易产生耐药性和抗药性；单一药物抗菌谱不够广，混合几种抗生素使用花费又较高；易产生副作用等等。最主要的是容易造成牛乳中残留药物的蓄积，直接导致乳牛发病，甚至还能危害人类的健康[2]。 1.4 研究的目的意义 茵陈为菊科植物滨蒿ArtemisiascopariaWaldst.etKit.或茵陈蒿ArtemisiacapillarisThunb.的幼苗[5]。现代研究发现，茵陈具有抗病原微生物，增强免疫，镇痛消炎等作用。除此外，茵陈还是无污染、无抗药性、无有害物质残留并且价廉优质的无公害绿色饲料和饲料添加剂。 乌梅,别名酸梅、黑梅由蔷薇科植物梅Prunusmume(Sieb1)Sieb1etZucc1(ArmeniacamumeSieb1)的干燥近成熟果实加工而成[6]。化学成分如萜类，甾醇等提取液对大肠杆菌、副伤寒杆菌、脑膜炎球菌、肺炎球菌、溶血性链球菌等均有抑制作用[7]。 （taraxacum officinale）为菊科多年生草本蒲公英属植物的干燥全草。蒲公英作为常用的中草药，更具有分布地域广、种类资源多、价廉易得、药理作用广泛的特点。大量研究证实，蒲公英具有广谱的抑菌作用，对革兰阳性菌、革兰阴性菌、真菌均有效且不产生耐药。宋振民等发现蒲公英提取物不仅对43 株甲氧西林敏感菌株有显著抑菌效果，而且对57 株甲氧西林耐药菌株（其中有50 株对128 μg / ml 苯唑西林也耐药）也具有强大的抑菌作用。孙继梅等蒲公英水煎剂对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、β-溶血性链球菌、大肠埃希菌、卡他布兰汉菌等临床常见感染菌有抑菌活性，尤其是对革兰阳性、阴性球菌有较好的抑制作用。 (Radix isatidis)别名靛青根、蓝靛根、靛根,为十字花科植物菘蓝(Isalis tinctoriaL. )根具有清热解毒、凉血利咽之功效[1] ，常用于治疗温热病等是传统的抗病毒中药之一。有一定的抗菌作用。其水浸液对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、 枯草杆菌、八联球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、甲型链球菌、肺炎双球菌、流感杆菌、脑膜炎双球菌均有抑制作用[1]。郑建玲等[1]经药敏试验证实各级提取物-总浸液、乙醇提取液、正丁醇萃取液对金黄色葡萄球菌均有较强的抑菌作用对肠炎杆菌和大肠埃希菌的抑菌作用也较显著并随逐级提取而抑菌活性亦逐级增强。由此可见具有广谱抗菌作用。 3.1 材料 .1.1 菌种 无乳链球菌购自菌种库，编号CVCC1886 3.1.2 实验药品及试剂 黄连茵陈乌梅5％灭菌枸橼酸钠无水乙醇葡萄糖蒸馏水 3.1.3 实验器材 试管微量。 .2 方法 .2.1 培养将灭菌的琼脂加热融化，待冷至50℃左右，加入无菌的脱纤鲜血待凝固后，置37℃培养24h[15]。 无菌血液是用无菌操作方法采自家兔的血液，加到盛有 5灭菌枸橼酸钠100mL三角瓶内，或加到盛有玻璃小珠的灭菌三角瓶内摇匀脱纤后置冰箱中待用。 .2.2 细菌 将试验菌株复壮、活化后接种加有5%小牛血清的普通肉汤培养基，置于恒温培养箱37℃培养18-24h。备好待用。利用平板菌落计数法算出菌液中的活菌数。将菌液稀释为109CFU/ml,置于4℃冰箱备用。 3.2.3 中药提取 称取