葡萄籽提取物中低聚原花青素HPLC-ESI-MS分离分析的研究.pdfVIP

葡萄籽提取物中低聚原花青素HPLC．ESI．MS分离分析研究 刘宇平，文大为，廖一平，刘虎威术 北京大学化学与分子工程学院100871北京 原花青素是植物黄酮中在酸性介质中加热可产生花青素的一大类多酚化合物的总称。低 聚的原花青素通常简称为OPC(OligomericProcyanidins)，具有良好的抗氧化性【1】。它被广泛 地用于酶抑制与保护血管【2】，防治高血压，抗炎、抗水肿，抗癌变【3】。由于这类物质的多样 性(一系列聚合物，已通过MS和NMR等谱学方法鉴别出16种)与相似性(单体多为儿茶 素、表儿茶素)，对天然提取的原花青素迸一步分离与检测仍是热点与难点。目前很多研究 是使用色谱方法对聚合度不同的原花青素进行分离，比如Sun等【4】以及Saucier[5]等用TLC 或HPLC分离酸解之后的原花青素类物质，进行了样品快速预处理、某些特定组分定量或者 聚合度分布的研究。在本文中，我们对从葡萄籽中提取出的OPC(纯度85％)进行HPLC—MS 研究，通过反相HPLC分离条件的优化以及ESI—MS检测器的联用，分离出多于二十个不同 组分，并通过质谱对各个峰对应物质的聚合状况得到了大略了解。本工作对于原花青素类物 质依照聚合度进行进一步分离与纯化具有积极的意义。 1 实验部分 低聚原花青素(OPC)样品由江南大学提供，来源为葡萄籽提取物，用50％甲醇配制成 酸铵(Aldrich)，实验用水使用娃哈哈纯净水。 1100高效液相色谱系统，配备DAD检测器及相应的色谱工作 HPLC分析使用Aglient MS 站，MS使用AgilenttrapXCT离子阱质谱仪，配备电喷雾(ESI)离子源及相应的质谱工作 站。色谱条件为：色谱柱，Winchrom X4．6 GPCI8，250mill，5lxm(由北京蕴泉公司提供)；流 动相A：含有0．05％三氟乙酸的5mmol／L甲酸铵溶液，流动相B：甲醇；流速0．4ml／min；洗 min min min min 脱梯度(B％)：0—10 22％，10．3322％．45％，33．4545％，45—11045．95％， 110．125min 95％；柱温30．眦；进样量，2此，DAD检测波长28011-111。DAD检测器出口与 质谱仪连接，使用ESI电离源，正离子模式检测；干燥气压力34kPa；干燥气流量10L／min； m／z。 干燥温度350。C，毛细管电压3000V；碎裂电压95．5v；扫描范围150．1500 2 结果与讨论 实际样品的色谱图和质谱图分别图1和图2。由于提取物组成成分的多样性，结构的相 似性，以及没有任何商业化标准品的现状，因此难以逐一确定每个峰的绝对结构；但通过 LC．MS 图1原花青素样品HPLC．ESI．MS谱图 *MS．∞,2mm咿’11∞) 27 M。 峰t卜…l。10l唧。 鼍78j +_s-1218……_142∞) 0 4130 1叩。 27臀 。 1． ．呷一 图2原花青幕样品部分色谱嶂对应的MS图