芍药甘草汤有效部位群抗乙型肝炎病毒作用的实验的研究.pdfVIP

10185214249 4中国药典2000年版一部【M】．北京，化工出版社2000 10 5月，下半月：37 5朱岩从治疗“非典”看抗病毒免疫药物的基础和应用现状[J】首都医药2003 芍药甘草汤有效部位群抗乙型肝炎病 毒作用的实验研究 赵军宁王晓东宋军彭晓华戴瑛邓治文 (四川省中药研究所610041) 摘要芍药甘草汤有效部位群芍甘多苷体外无明显细胞毒性作用浓度下，在第4天、第8天对HBV 转染的HepG 提示芍甘多苷在体外有显著抗HBV活性。鸭乙型肝炎病毒(DHBV)感染鸭体内试验，芍甘多苷口服可 多苷在鸭体内有明显的抗鸭乙型肝炎病毒的作用。 关键词芍药甘草汤有效部位群芍甘多苷 乙型肝炎病毒实验研究 芍甘多苷系由《伤寒论》名方芍药甘草汤为基础方，经提取分离纯化得到的的复方有效部位群。 能清热解毒，柔肝解郁。为治疗慢性乙型病毒性肝炎的新型有效药物。本文报告本晶抗乙型肝炎病毒 作用的实验研究结果。 I实验材料 芍药甘草汤有效部位群：浅黄色粉末，由芍药甘草汤合并提取获锝，含芍药总苷、甘草酸和总黄 酮苷总计54．7％，由四川省中药研究所药化室提供。 拉夫米定片：葛兰素威康英国行动有限公司生产，批号B038238。 Sinai医学中心构建，解放军302医院引进后自行传代培养。 性病毒血清。接种l周后，分别颈外静脉抽血，用地高辛标记的DHBVDNA探针经斑斑点杂交检测筛 选出感染阳性鸭，饲养至2周龄作为实验动物。 + 丹麦Tuneion VuegOScan(Brisa-620Si3扫描仪、酶标标阅读仪(BiO-TEK公司)等。 G-418，美国CIBCO 杂交试剂盒(用罗氏公司的地高辛标记试剂盒制备)、DMEM培养液(含380ug／ml 2方法与结果 2．1体外乙型肝炎病毒转染HepG22．2．15细胞培养试验 2．1．I试验方法 2．I．I．I细胞培养 孔lml，37。C5％．氧化碳培养24小时，细胞长成单层后进行实验。 2．】．1．2药物细胞毒性测定 an．z．96孔细胞培养板，每浓度 芍甘多苷用培养液配制成32mg／ml溶液，以2倍稀释至0．25mg／ml 4孔，每4天换同浓度药液，设无药物细胞对照组。以观察细胞病变为指标，为观察芍甘多营对乙型肝 炎病毒基因转染的人肝癌2．2．15细胞的毒性，在接种2．2．15细胞后24小时，加2倍稀释药液。实验自 meuench法计算TC50、 和最大无毒浓度(TCo)，计算每浓度药液平均细胞病变程度和抑制％。按Reed TCO。 Tc50-A11til。甙B+——』型脚呲酸L×c 50％抑制百分率一50％抑制百分率 A=log50％药物浓度 B=l0950％药物浓度 C=109稀释倍数 2．1．1．2病毒抗原Omsag、HbeAg)抑制试验 同时设阳性对照和细胞对照。每4天换液1次，第4、第8天时分别收获培养液，用中国同位素公司北 式计算细胞对照及每epm均值及标准差，P／N值和抑制百分率(％)、半数有效浓度(IC50)，重复2次。 2．1为抗原阳性 ①PIN值=—_宴聋章』四￡j辈孥蛆氐蛆gL 阴性对照c哪r_空白对照epm ②抗原抑制百分率(％)=——细胞越腿』四￡生懿堕l吐哩一一×100％ 细胞对照cpⅡr一阴性对照epm ③计算药物抑制抗原半数有效浓度(tC50)