基因C型鸭甲肝病毒VP1基因的克隆和原核表达.pdfVIP

552蟋》2010年学术年会 T040017 基因C型鸭甲肝病毒旧J基因的克隆及原核表达 皮晋魁张焕容 (1．西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都610041；2．动物医学四川省高等学校重点实验室。四川成都610041) viral 鸭病毒性肝炎(Duck virus，DI-IV)引起雏 hepatitis，DVH)是由鸭肝炎病毒(Duck hepatitis 鸭的一种急性、高度致死性传染病，以肝炎为主要特征。DHV包括三个血清型，血清1型DI-IV又称为鸭 甲肝病毒(Duck Avirus，DHAV)，根据衣壳蛋白编码区的序列同源性和进化分析的结果，可 hepatitis 国流行。基因A型和C型DHAV在我国许多养鸭地区的同时流行是我国许多鸭场针对传统的基因A型鸭甲 肝病毒采取措施后仍发生鸭病毒性肝炎的根本原因【z】。本研究旨在对本实验室分离的基因C型DHAV VPl全基因进行扩增、克隆及原核表达，为鸭病毒性肝炎的诊断试剂开发、新型疫苗研究以及基因C型 Ⅵ，l全基因，将其克隆至PMDl9一T载体，测序结果为720bp。这与施少华等【3】，范卫国等【4J的报道一致。 PMDl9．T-VPl经EcoR (+)．VPl，经表达工程菌筛选，证明该重组质粒在E．coli 8h诱导表达最高量的相对分子质量约47KDa的融合蛋白。因为对本实验克隆得到的VPl基因序列分析， Rosetta(DE3)的表达量最高，这为今后大量稳定表达基因c型DHAVVPl蛋白奠定了基础。Western—blot 分析表明：该重组蛋白可与兔抗基因C型鸭甲肝病毒阳性血清发生特异性反应，不能与健康未免疫基因 C型DHAV的兔血清反应，证明该蛋白具有良好的反应原性。重组VPl蛋白在体外大量稳定的表达，为 其作为诊断抗原建立血清学诊断方法、进一步开展DHAV的免疫学和DHAV致病机理研究奠定了基础， 也为DHAV新型疫苗的研究提供了新的思路。 参考文献 L，PanM，FuY．eta1．Classificationofduck VilalSintothree basedonmolecular 【l】Wang hepatitis genotypes evolutionary Genes，2008，37：52—59． analysis[J]．Vuas 【2】彭小薇，徐永亮。王笑言等．鸭甲肝病毒VPl基因的克隆和序列分析阴．中国兽医杂志，2009，45(9)：18·19． 【3】施少华，程龙飞，傅光华等．新型鸭肝炎病毒VPl基因的序列分析及其原核表达们．中国动物传染病学报2010，18 (5)：12．17． 【4】范卫国，杜佳慧，曹瑞兵等．新型鸭肝炎病毒GDl株VPl结构蛋白的基因分析及B细胞抗原表位预测[刀．畜牧与兽医， 2011，43(1)：65．68．