GnRH免疫去势基因疫苗构建.pdf

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第卜六届学术研讨会论文集 GnRH免疫去势基因疫苗的构建 叶文剑，姜勋平，刘桂琼 (华中农业大学动物科技学院，武汉430070) 引 言 去势可以减少动物的攻击性行为、提高肉质、控制野生动物的数量和增加宠物的温驯。 传统的手术去势存在应激性强、易感染等副作用，而免疫去势可以克服上述不足，并提高动 物的福利。GnRH免疫去势基因疫苗在体内产生的抗体能够中和内源性的GnRH进而降低 LH和FSH的分泌，达到去势的目的。本研究构建GnRH的基因疫苗载体，为在动物上的免 疫去势应用奠定基础。 材料与方法 酶切和测序鉴定。将上述质粒转染Hela细胞，在24h提取细胞的总RNA进行RT-PCR和在 blot检测其在真核细胞中的转录和表达情 72h提取细胞的总蛋白进行SDS．PAGE、Western 况。 结果 质粒经酶切鉴定和测序也完全正确，说明单拷贝和双拷贝载体构建成功。 细胞中表达出27KD大小的融合蛋白，与目的蛋白的大小一致。经Westernblot检测结果说 明表达的融合蛋白就是目的蛋白。 讨论 本研究构建了用于免疫去势的单拷贝pVAX．SG和双拷贝pVAX．S2G基因疫苗，经酶切 测序完全正确。在实验动物试验之前，需要在真核细胞中验证其是否表达，选择Hela细胞 的原因是因为该细胞系容易培养、生长速度快，而且贴壁牢的特点能够抵御转染过程中脂质 体、重组蛋白对细胞的伤害。 因为GnRH是十个氨基酸的小肽，属于半抗原，所以我们选择将其连接在载体蛋白上， 选择HBsAg作为载体蛋白的原因是其无需信号肽序列就可以分泌到细胞外面，而且能将连 接在其C末端的肽段暴露在融合蛋白的表面，而且容易刺激机体的免疫反应。有研究表明 双拷贝的质粒能够增加机体中的抗原表达量，从而增强其介导的免疫反应，所以同时也构建 blot检测证明转录和表达 了双拷贝的GnRH基因疫苗。经RT-PCR、SDS．PAGE和Western 成功而且正确，为在动物上应用GnRI-I基因疫苗进行免疫去势奠定了基础。 参考文献 RJ．Is a CellEndocrinol thererolefor [1】McLaughlinEA，Aitken immunocontraception?Mol 201l 201 l-03-15；335(1)：78-88． et 【2】KhanMA，Ferro YSongM，OgitaK a1．1mmunisationofmale VA，KoyamaS，Kinugasa micewitha DNAvaccine encoding releasinghormone(GnRH·I)and plasmid gonadotrophin 2007 invivo．Vaccine T-helper fertility 2007-05—04；25(18)：3544-53． epitopessuppresses